[发明专利]鸡球虫高免卵黄抗体的制备方法

说明书

技术领域

本发明公开了一种鸡球虫高免卵黄抗体的制备方法，属于生物制剂制备与禽病防治技术领域。

背景技术

鸡球虫病是由是由危害养鸡业的重大疾病之一，全世界每年因鸡球虫病造成的损失达80亿美元，目前在临床上防治该疾病主要是通过化学药物，由于不合理的用药方案，造成耐药性的普遍存在和严重的药物残留等问题，给防治该疾病带来很大的困难，同时造成食品安全等问题。

禽卵黄抗体(egg yolk immunoglobulin，IgY)是禽类B淋巴细胞在抗原物质刺激下所产生并沉积在卵黄中的能与抗原发生特异性反应的一种球蛋白，抗体作为治疗药物具有作用迅速、疗效确切等优点。IgY来源于禽的血液，卵泡可以将禽血液中的抗体选择性地主动转运到卵黄中，许多实验证明卵黄中的IgY浓度能长期维持在相当于甚至超过血液浓度的水平上。目前大多数禽类疾病，特别是用抗生素治疗无效的病毒性疾病，如鸡法氏囊病、鸡新城疫、鸡减蛋综合征、鸭病毒性肝炎、小鹅瘟等，都已有成功开发出高效卵黄抗体的报道。例如《抗轮状病毒卵黄免疫球蛋白制备工艺及生物活性研究》荫俊等，解放军药学学报，第16卷第2期，2000年。《仔猪腹泻多病原特异性卵黄抗体治疗和预防剂的研究》王金洛等，2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集，2005年。与本发明最相关的是中国专利号为ZL 200510027330.0的《抗猪伪狂犬病卵黄抗体的制备方法》。尽管两者都利用了抗原产生抗体的原理，但是与本发明在目的，技术路线尤其在所选抗原的构思及制备上完全不同。

发明内容

根据IgY在疾病防治方面的应用领域空前扩大，理论上能引起动物体液免疫的疾病都可以通过卵黄抗体治疗，不仅可用于防治细菌、病毒等微生物引起的疾病，而且还能用于防治寄生虫疾病的原理。因此，本发明的目的是提供一种抗鸡球虫病的高免卵黄抗体制备方法，采用高纯度免疫混合抗原，加免疫佐剂后接种未免疫的产蛋鸡，诱导其产生高免卵黄抗体。该抗体经注射或口服后，可以有效预防和治疗鸡球虫病，减少鸡群临床耐药性产生，解决药物残留等问题。

实现本发明目的技术方案是：提取球虫各发育阶段的免疫抗原，混合后加入适宜的免疫佐剂，选择合理的免疫程序免疫未免疫的产蛋鸡，收集卵黄分离纯化卵黄抗体，并进行效价测定，选择高效价卵黄抗体制备成口服或注射液，用于鸡球虫病的防治。其具体的步骤如下：

(1)免疫抗原的提取、纯化和免疫佐剂的选择，包括提取、纯化鸡球虫各发育阶段的孢子生殖阶段抗原、裂殖子生殖阶段抗原和配子生殖阶段抗原。

(2)按一定比例混合以上三种抗原，选择适宜免疫佐剂与抗原混合制备成免疫用混合抗原。

(3)制定合理的免疫程序，选用未免疫的产蛋鸡，采用不同的免疫佐剂制备的免疫用混合抗原胸肌注射免疫鸡。

(4)收集被免疫鸡所产鸡蛋，即在鸡三免后一周开始收集所产鸡蛋，分离出卵黄，采用水稀释法分离纯化卵黄抗体，并测定其抗体效价。

根据合理的免疫程序在采用免疫用混合抗原胸肌注射免疫蛋鸡时，必须连续免疫三次，每间隔7天免疫一次，第三次免疫后的第7天收集鸡蛋备用，用琼脂扩散试验检测蛋黄中抗体的效价；同时设立对照组。

卵黄抗体的提取纯化采用水稀释法即将卵黄液用10倍水稀释后，调节pH值至5.2，4℃静置6小时以上，离心去除颗粒，再用硫酸盐沉淀浓缩，并经过超滤等方法进一步纯化、浓缩。

通过以上述步骤获得的球虫各发育阶段的免疫抗原，是球虫发育的孢子生殖阶段、裂殖子生殖阶段和配子生殖阶段所提取、纯化的混合抗原；获得的鸡球虫高免卵黄抗体，是鸡柔嫩艾美尔球虫株和毒害艾美尔球虫株的高免卵黄抗体。

按照国家兽用药品质量标准将高免卵黄抗体制备成注射液或口服液并进行该制剂安全性试验后即可用于规模化的有效预防和治疗鸡球虫病。

本发明的明显效果是：

临床试验结果表明，对鸡柔嫩艾美尔球虫病和鸡毒害艾美尔球虫病的保护率分别为100％和96.7％，其抗球虫指数分别为184.8和165.4，该产品产业化的成功实施，将为防治鸡球虫疾病提供一条新的思路和途径，势必将会改变业内对该疾病防治观念，同时为解决药物残留等一系列与人类健康相关的新问题提供了基础。

具体实施方式