[发明专利]抗人淋巴细胞免疫球蛋白的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫球蛋白的制备方法，特别涉及抗人T细胞猪免疫球蛋白(ALG—P)的 制备方法。

背景技术

抗人T细胞猪免疫球蛋白是针对淋巴细胞及其功能的特异性生物性免疫抑制剂，这一产 品系用人淋巴细胞免疫猪，取其血浆提取的特异性免疫球蛋白。主要用于临床器官移植的免 疫排斥预防及治疗、骨髓移植的移植物抗宿主反应预防，以及再生障碍性贫血等病的治疗； 自身免疫性溶血性贫血、原发性血小板减少性紫癜及其它免疫病也可试用。

现行生产抗人T细胞猪免疫球蛋白的工艺是硫酸铵盐析法，该方法存在的问题是：1. 难以大规模生产，产量低；2.生产过程中浪费大；3.生产过程中产品的废液有腐蚀性，会造 成环境污染；4.生产成本高；5.硫酸铵盐析法工艺较为落后，生产过程较为复杂，要使用 的化学试剂繁多，普通工作人员在短时间内难以掌握；6.生产周期长，设备占用率高。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的抗人淋巴细胞免疫球蛋白的制备方法，使其具有操作简单 易于掌握、生产周期短、无环境污染、可大量生产、适合生产动物源性的抗人T细胞免疫球 蛋白等特点。

本发明选择猪作为血浆来源的动物，经过比较，以猪血浆作为原料有以下明显的优点：

1.除灵长类动物外，猪和人的基因结构最具有同源性，其血浆蛋白质的结构和理化性质 与认得血浆蛋白质相近，决定了猪的蛋白质作为异种蛋白在人体内具有较小的副反应。

2.猪血浆易于采集，血浆量多。

3.猪的免疫球蛋白分子量约16万左右，接近于人的免疫球蛋白分子量，反应条件容易 控制，副反应较小。

实现本发明的技术方案是：

1.制备免疫血浆：用人外周血T淋巴细胞或人胸腺细胞免疫健康猪，经检验合格后采 集、分离出猪血浆。

2.20％乙醇制作：精确称量猪血浆量，倒入不锈钢大罐中，启动搅拌桨缓慢搅拌，按 血浆量加入20％～30％的0.85％的生理氯化钠溶液，搅拌均匀，加入pH4.0的醋酸盐缓冲 液调整混合溶液的pH值为6.0±0.50，再将混合液的温度降至—4.0℃±-1.0℃，加入95 ％的乙醇，乙醇温度不低于—25℃，加完乙醇，继续搅拌2小时后，停止搅拌静置8小时。

3.组分I+II+III沉淀分离：用低温高转速离心机或压滤机分离出组分I+II+III沉淀， 上清液废弃。

4.14％乙醇制作：将组分I+II+III沉淀倒入装有温度低于4℃的注射用水的大罐中， 缓慢搅拌，注射用水用量为投浆量的0.9倍，连续搅拌2小时后，加入磷酸盐缓冲液I调整 pH值为5.0±0.50，持续搅拌1小时，再补入低于4℃的注射用水，注射用水用量为投浆量 的1.3倍，加入磷酸盐缓冲液II调整pH值为6.0±0.50，持续搅拌1小时，再补入温度低于 4℃的注射用水，注射用水用量为投浆量的1.7倍，将混合液温度降至—2℃±-1.0℃，加入 95％的乙醇，乙醇温度不低于—25℃，加完乙醇，继续搅拌2小时后，停止搅拌静置8小时。

5.组分I+III沉淀分离：用低温高转速离心机或压滤机分离、收集上清液；沉淀为组分 I+III，废弃。

6.25％乙醇制作：精确计量上清液体积，加入3mol/L氯化钠溶液，加入量为上清量的 0.0167倍，再加入1mol/L碳酸氢钠溶液调整pH为7.0±0.50，将混合液温度降至—7.0℃ ±-1.0℃，加入95％的乙醇，乙醇温度不低于—25℃，加完乙醇，继续搅拌2小时后，停 止搅拌静置8小时。

7.组分II沉淀分离：用低温高转速离心机或压滤机分离出组分II沉淀，上清液废弃。

8.免疫球蛋白精制：用0℃的0.85％的生理氯化钠溶液溶解组分II沉淀，生理氯化钠 溶液用量为组分II重量的3～5倍，缓慢搅拌2小时，使沉淀均匀浆化。开始澄清过滤，然 后超滤脱醇，取样测蛋白浓度，根据测定的蛋白浓度的结果将蛋白浓度稀释至1％，加入经 醛化的人红细胞，加量为投浆量的15％～30％，放置4℃冷库缓慢搅拌，冷吸收8～10小时。 离心取上清，上清中加入经醛化的人胎盘渣和健康人血浆，胎渣加量为投浆量的15％～30 ％，健康人血浆加量约为投浆量的5％，放置4℃冷库缓慢搅拌，冷吸收8～10小时，然后 将胎盘渣过滤出除。