[发明专利]脂氧素在治疗肿瘤中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及治疗肿瘤的药物，特别涉及生物分子在治疗肿瘤中的应用，即抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤的播散转移。

背景技术

肿瘤是危害人体健康最严重的疾病之一，由于其发病原因复杂，不能有效预防。目前治疗肿瘤的主要方法有化疗、放疗和手术治疗三种。然而许多癌症患者在接受手术、化疗或放疗后，癌细胞反而加速扩散甚至“越治越扩散”[参见Homs MY，Kuipers EJ，Siersema PD.Palliativetherapy.J Surg Oncol.2005，92(3)：246-56.]。加之目前多数抗肿瘤药物不具有明显的选择性，对正常细胞也存在明显的毒副作用。因而，研发低毒性、高选择性特别是抗肿瘤扩散的药物正是当今医学界亟待解决的课题。

脂氧素(Lipoxins，LXs)是哈佛大学Serhan教授于1984年发现的二十烷家族中一类花生四烯酸的代谢产物，在脂加氧酶作用下经跨细胞途径(transcellular pathway)合成[参见2Clarkson MR，McGinty A，Godson C，et al.Leukotrienes and lipoxins：lipoxygenase-derived modulators ofleukocyte recruitment and vascular tone in glomerulonephritis.Nephrol Dial Transplant，1998，13：3043-3051.]。随着对LXs研究的深入，人们发现炎症的发生与消散过程中LXs与白三烯(leukotrienes，LTs)相互拮抗，前者有很强的抗炎症效应，被称之为炎症反应的“刹车信号(braking signals)”或“停止信号(stop signals)”[参见O′meara YM，Brady HR.Lipoxins，leukocyte recruitment and theresolution phase of acute glomerulonephritis.Kidney Int Suppl.1997，58：S56-61.]。

发明内容

本发明的任务是提供一种治疗肿瘤的药物，使其具有能有效抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤的播散转移等作用。

本发明提供的这种治疗肿瘤的药物是脂氧素(Lipoxins，LXs)。

实验资料

一、实验材料

1.实验动物BALB/c-nu/nu裸小鼠32只，鼠龄4～6周，体重15～20g，雌性，购自华中科技大学同济医学院动物研究所，饲养条件按无特定病原体(SPF)要求。

2.试剂与仪器1640培养基(Hyclony公司)，胎牛血清(Gibco公司)，脂氧素(Cayman公司)，[³H]-TdR为中科院上海原子能研究所产品，琼脂糖，Trizol，胰蛋白酶、DMSO及(Sigma公司)，线粒体膜电位检测试剂盒和DNA Ladder抽提试剂盒(碧云天生物技术研究所)。CO2培养箱(Thermo Forma公司)，PCR仪(Mj Rsearch公司)，流式细胞仪(Becton公司)，紫外分光光度计、激光共聚焦显微镜(Olympus公司)。

3.细胞来源人白血病细胞株K562和HL60、人结肠腺癌细胞株L-174-T(购自中国科学院上海细胞生物学研究所)。培养于含10％胎牛血清的RPMI-1640培养液中并置于37℃、5％CO₂细胞培养箱内，定期换液，细胞70-80％融合时进行传代。按实验设计将培养细胞分组。

二、实验方法

1 RT-PCR检测lipoxin A4 receptor表达

各组细胞处理24小时后，采用Trizol提取各样品总RNA，紫外分光光度计测定纯度定量后取4μg进行逆转录，然后取1μl逆转录产物进行PCR反应。lipoxin A4 receptor上游引物为5′-CACCAGGTGCTGCTGGCAAG-3′，下游引物为5′-AATATCCCTGACCCCATCCTCA-3′。脂氧素受体(ALXR)的退火温度为：64℃，循环次数为30次。产物于2％琼脂糖凝胶电泳后照相并行图像分析。

2细胞增殖检测

2.1 ³H-TdR法

细胞接种于24孔板，处理24小时后，加入³H-TdR 74kBq/well，继续培养6h后，收集细胞，液闪仪测放射性活度。