[发明专利]重组杆状病毒AcBacΔCC－GP41及其构建方法

权利要求书

1.重组杆状病毒AcBac^ΔCC-GP41，其特征在于，该重组杆状病毒AcBac^ΔCC-GP41为：CCTCC NO.V200702。

2.实现权利要求1所述的重组杆状病毒AcBac^ΔCC-GP41的构建方法，其特征在于，该构建方法按下列步骤顺序进行：

a、用聚合酶链式反应PCR从HIV-1病毒中扩增出gp41基因；

b、按美国Promega公司pGEM-T Easy载体试剂盒的说明，将扩增的gp41基因序列克隆到pGEM-T Easy上，经过IPTG/X-gal的蓝白斑筛选和限制性内切酶EcoRI酶切鉴定，获得含gp41基因质粒pGEM-T-gp41，并进行测序验证无突变；

c、利用INVITROGEN公司的供体质粒pFastBacHTc，按照分子生物学操作手册，用限制性内切酶BamHI和XhoI双酶切pGEM-T-gp41，获得带双酶切粘端的gp41；

d、将带双酶切粘端的gp41克隆到用限制性内切酶BamHI和XhoI双酶切供体质粒pFastBacHTc的多克隆位点MCS上，使gp41基因序列与6个组氨酸6×His标签对框融合，获得新的供体质粒pFastBacHTc-gp41；

e、按照INVITROGEN公司Bac-to-Bac杆状病毒表达系统操作手册，将新的供体质粒pFastBacHTc-gp41转化到含Ac-bac^ΔCC的大肠杆菌DH10B的感受态细胞中，获得重组穿梭载体Ac-bac^ΔCC-gp41；

f、按照脂质体细胞转染试剂盒Lipofectin的转染说明，用含10％胎牛血清的Grace’s培养基将昆虫细胞Sf9或Sf21在培养皿内于27℃培养3小时，把重组的Ac-bac^ΔCC-gp41的DNA转染到昆虫细胞中，然后将其在含10％胎牛血清的Grace’s培养基于27℃培养5～7天，收集培养基上清，上清中所含的即为表达全长GP41蛋白的重组杆状病毒AcBac^ΔCC-GP41。