[发明专利]一种猪肌内脂肪含量基因Lpin1的克隆及其应用

权利要求书

1.一种猪肌内脂肪含量基因Lpin1，它的cDNA序列如序列表SEQ ID NO：1所述。

2.根据权利要求1所述的cDNA序列，其特征在于：所获得的基因Lpin1序列长度为5559bp，序列中包含2685bp的开放阅读框，111bp的5’非翻译区和2763bp的3’非翻译区。

3.一种猪肌内脂肪含量基因Lpin1，它的DNA序列如序列表SEQ ID NO：3所述。

4.根据权利要求3所述的DNA序列，其特征在于：序列表SEQ ID NO：3的第61bp处有一个C61-T61的碱基突变，导致Taq1-RFLP多态性。

5.根据权利要求3所述的DNA序列，其中检测C61-T61碱基处突变的正、反向引物的DNA序列如下所示：

正向引物：5′GTTTGTCACCGTGAAGGA 3′，

反向引物：5′AAGCCACAGTAATCAGAACA 3′。

6.权利要求1-5所述的基因在猪分子标记辅助选择中的应用。

7.一种筛选适用于猪肌内脂肪含量性状的分子标记的方法，按照以下步骤：

第一步：

用人Lpin1基因cDNA为信息探针，作同源序列筛选，获得相似性80％以上的EST；然后构建猪EST-重叠群，设计引物扩增cDNA片段，PCR产物纯化、克隆和测序；设计3’RACE引物；提取猪肌肉组织总RNA并做cDNA第一链反转录；RACE的PCR扩增和RACE产物的纯化、克隆和测序；通过序列分析获得如序列表SEQ ID NO：1所述的cDNA序列；

第二步：

根据序列表SEQ ID NO：1所述的cDNA序列与人Lpin1的基因组全长DNA序列的比对结果大致得出外显子的拼接位点，并根据猪Lpin1基因cDNA筛选猪DNA序列，设计引物进行PCR扩增，PCR产物纯化、克隆和测序，获得如序列表SEQ ID NO：3所述的DNA序列。