[发明专利]七叶树总皂苷制备方法及其抗肥胖作用

说明书

技术领域

本发明公开一种七叶树总皂苷的制备方法及在预防和治疗肥胖的医药品和保健食品中的应用，属于中药有效成分提取技术领域。

背景技术

《本草纲目拾遗》记载；″娑罗树出西番海中…秋后结实如栗可食，正所谓七叶树也″。本发明所述的七叶树种子为七叶树科植物日本七叶树(Aesculus Turbinata Blume.)的干燥成熟种子。本发明所涉及的七叶树种子总皂苷药效，目前临床上主要用于脑水肿、创伤性肢体肿胀、静脉炎等疾病的辅助治疗。七叶皂苷药理作用可靠，临床用途广泛，不良反应少，尤其在抗渗出、消肿胀、对机体保护作用等方面发挥着重要作用。此外，该药在治疗腰椎间盘突出症、流行性乙型脑炎、视网膜炎、肾病综合征、腹泻、周围神经性疾病等方面也有研究报道。但是经检索未见有七叶皂苷抗肥胖作用的报道。目前，世界肥胖人口日益增加，肥胖对人们的健康影响十分严重，容易引发高脂血症、动脉粥样硬化、冠心病、高血压、糖尿病等一系列疾病。本发明所述七叶皂苷的抗肥胖作用对开发抗肥胖药物及保健食品具有十分现实的意义。

发明内容

本发明提供了日本七叶树种子总皂苷提取物的制备方法，适用于工业化生产。

本发明公开了日本七叶树总皂苷提取物预防及治疗肥胖的用途。

本发明中日本七叶树种子提取物的提取方法包括以下步骤：

干燥的日本七叶树种子粗粉5kg用80％乙醇20L浸泡过夜，超声波室温条件下提取30min，过滤，重复三次，合并滤液，减压浓缩，得到80％乙醇提取物，水溶，过大孔树脂D101柱，依次用水、80％乙醇洗脱。乙醇溶液减压浓缩，真空干燥，得七叶总皂苷400g。七叶总皂苷用Zorbax Columns C₁₈高效液相色谱仪半制备柱经制备、分离、纯化得化合物1和2，经鉴定分别为化合物七叶皂苷1b、七叶皂苷IIa。

实验例1

胰脂肪酶活性的测定

1实验材料与方法

1.1材料：

[3H]三油酸甘油酯购于日本东京Amersham公司；胰脂肪酶购自Sigma公司。七叶树总皂苷由本室提供。

1.2实验方法：

从三油酸甘油酯释放油酸的量来判定酶的活性。90μmol/L三油酸甘油酯，12.6μmol/L卵磷脂，9.45μmol/L牛磺胆酸置于9mL的0.1mol/LN-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙磺酸(TES)，pH7.0，含有0.1mol/LNaCl，超声波处理5min。测定溶液总体积200μL含有下列物质：50μL七叶总皂苷，50μL胰脂肪酶，0.5μmol/L三油酸甘油酯，0.053μmol/L牛磺酸，0.07μmol/L卵磷脂，20μmol/L TES，20μmol/LNaCl，于37℃，pH7.0的条件孵化30min。释放油酸的测定按Belfrage^[1]的方法进行测定。

2数据的统计学处理

所有数据以X±Sx来表示。用t检验进行显著性检验。

3结果

七叶皂苷对胰脂肪酶的作用显著，随着剂量的增加对胰脂肪酶的抑制作用越显著，在2.0g.L^-1其活性只有2.3％(见表1-1、附图1、附图3)

表1-1七叶皂苷对胰脂肪酶的作用

N＝4

4结论

七叶皂苷在体外对胰脂肪酶活性有非常显著的抑制作用，在2.0g.L^-1时胰脂肪酶活性只有2.3％。

实验例2

小鼠排泄物中三酰甘油含量的测定

1实验材料与方法

1.1材料：

实验动物，3周龄的ICR系雌性小鼠购自于大贩CLEA公司，购买后置于室温25±1℃，相对湿度60％的室内并且明暗12h循环适应1周，供试验。预备饲养期间，自由采食和饮水。七叶树总皂苷由本室提供。

1.2实验方法：

将ICR系雌性小鼠分成5组，每组12只，分别食普通饲料、高脂肪饲料、高脂肪饲料+0.35％七叶总皂苷、高脂肪饲料+1％七叶总皂苷、高脂肪饲料+2％七叶总皂苷。3天后测定小鼠排泄物中三酰甘油含量，用和光三酰甘油酯E-试剂盒方法测定。

2数据的统计学处理

所有数据以X±Sx来表示。用t检验进行显著性检验。

3结果

3天后与对照组相比，食用高脂肪组的小鼠其粪重降到0.14±0.035g，食用高脂肪食物+0.35％、1％、2％七叶皂苷，其粪重和粪中三酰甘油含量都比高脂肪组小鼠有所增加，2％七叶皂苷组作用显著(见表2-1)。