[发明专利]动物布鲁氏菌抗体胶体金试纸膜检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明公开一种动物布鲁氏菌抗体胶体金试纸膜检测试剂盒，用于布 鲁氏菌病的诊断，属于动物疫病诊断技术领域。

背景技术

布鲁氏菌是一种革兰氏阴性、特异性胞内寄生菌，能感染多种动物和 人。目前，根据致病性及宿主的不同将布鲁氏菌分成6个种，即羊布鲁氏 菌、牛布鲁氏菌、猪布鲁氏菌、沙林鼠布鲁氏菌、绵羊布鲁氏菌、犬布鲁 氏菌。其中在世界范围内广泛流行的是牛、羊、猪布鲁氏菌，对畜牧业危 害巨大，更重要的是它们均能引起人的感染，威胁着公众健康。所以对布 鲁氏菌病诊断方面的研究一直受到世界各国的关注。传统的诊断动物布鲁 氏菌病的血清学诊断方法包括：快速滑动凝集试验(RSAT)、标准试管凝 集试验(SAT)、2-巯基乙醇试管凝集试验(2ME)、补体结合试验(CFT) 等。它们都存在着以下不足，首先，与其它细菌(如：耶尔森氏菌O9、大 肠杆菌O157)发生交叉反应现象很难避免；第二，传统诊断方法费时、费 力且易出现假阳性；第三，传统的诊断方法不能区分布鲁氏菌病的病原种 型。因此，建立一种简便、快速、特异的诊断方法，对于动物布鲁氏菌病 的诊断、检疫和流行病学调查具有重要的意义。

发明内容

本发明公开一种动物布鲁氏菌抗体胶体金试纸膜检测试剂盒，该试剂 盒可以检测牛、羊、猪布鲁氏菌抗体，与传统的血清学方法比，更简便、 快速、特异。适用于动物布鲁氏菌病的诊断、检疫和流行病学调查。

本发明的解决方案是根据抗原、抗体能特异结合的免疫学原理，利用 胶体金免疫层析技术和银染加强技术，以重组的金黄色葡萄球菌A蛋白 (SPA)作为金标蛋白，以高纯度的布鲁氏菌LPS作为包被抗原，利用羊 抗牛IgG为质控线制备胶体金试纸膜。本试验试剂盒包括胶体金试纸膜， 阴、阳性试剂，塑料吸管离心管以及说明书。

试剂盒的具体制作方法

用热酚法和冷酚法提取牛布鲁氏菌544A和羊布鲁氏菌16M的LPS， 经Sephadex G-50层析柱纯化后，LPS的含量为1.21～2.31mg/mL，琼扩试 验表明该抗原能与相应的抗体发生反应，且不发生种内交叉。利用纯化的 LPS作为检测线包被抗原，用重组金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)作为金 标蛋白，根据胶体金免疫层析法的基本原理组装成试纸膜。研究结果表明， 牛、羊、猪动物布鲁氏菌抗体检测试纸最低检测蛋白量分别为1μg/mL、 2μg/mL，不与大肠杆菌O157，小肠结肠炎耶尔森菌O9、沙门氏菌、胸膜 肺炎放线菌的阳性血清发生交叉反应，4℃保存期为12个月。20份布鲁氏 菌阳性血清用PBS1:1稀释之后，用本实验组装的试纸进行检测，结果19 份为阳性，符合率为95％。18份布鲁氏菌样本血清，分别用平板凝集试验 (PAT)和试纸进行检测，结果阴性、阳性符合率均为100％。

试剂盒由以下结构组成：

(1)试纸膜：

①样品垫：紧密连接于试纸的金标垫，是试纸进行检测的部分。主要 接触样品液，利用样品垫的吸附使液体前进，但液面不能超过样品垫的 MAX线。

②玻璃纤维膜：位于样品垫的上部，是金标蛋白固定的材料。布鲁氏 菌抗体试纸的玻璃纤维吸附有金标探针，即所谓的金标垫。金标探针是由 胶体金标记重组金黄色葡萄菌A蛋白而成，可特异性的吸附布鲁氏菌抗体。

③硝酸纤维膜(NC)：位于玻璃纤维膜的上部，膜上有检测线(T)和 质控线(C)。布鲁氏菌抗体胶体金试纸的T线包被布鲁氏菌特异的LPS， C线包被羊抗牛IgG。

④吸水纸：位于试纸的最上部，紧连着NC膜。试纸吸附样品液的动力 主要靠吸水纸和样品垫。

⑤塑料垫板：主要起支撑试纸的作用，为硬质塑料板。

(2)阴、阳性试剂：

①阴性试剂：试剂盒使用时，作为阴性对照。

②阳性试剂：试剂盒使用时，作为阳性对照。

(3)塑料吸管：主要用于布鲁氏菌病样本的采集。

(4)离心管：主要用于分离样本时离心使用。

(5)说明书：主要介绍试剂盒的使用方法。

以下是抗体试纸膜的使用方法：