[发明专利]杀灭土壤线虫微生态菌制剂及其制备方法

说明书

技术领域

生物技术领域，本发明涉及一种杀灭土壤线虫微生态菌制剂及其制备方法。

背景技术

目前我国的土壤生态系统已经或正在受到严重破坏，土壤线虫显著增多，植物病害的种类和范围不断增加，这都是土壤生态系统遭到破坏的明证。其中土壤线虫是直接影响农作物产量的土壤害虫，尤其是种植花生、红薯的土壤，线虫可以把整块整块土地的花生、红薯吃光或破坏，几乎绝收。以前只是寻求化学杀虫剂，但其第一年有效，第二年则几乎无效，而且它所造成的土壤污染几十年都消除不掉。所以，研究开发微生物制剂杀灭线虫势在必行。国内外已有一些研究，但是，还未见高密度、高活性，能大面积使用的微生态菌制剂的报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种高密度、高活性的杀灭土壤线虫微生态菌制剂及其制备方法。

本发明解决该技术问题所采用的技术方案是：

以巨大芽孢杆菌(AS 1.217，Bacillus megaterium)为主，辅以适量细黄链霉菌(AS4.891，Streptomyces microflavus)，并吸附固定化于麦麸上制备成菌制剂。两株菌种均购于中国科学院微生物研究所菌种保藏中心。

杀灭土壤线虫微生态菌制剂是上述巨大芽孢杆菌与细黄链霉菌优化组合的复合微生物组成，其中各组分的重量百分比为：巨大芽孢杆菌60％～80％，细黄链霉菌20％～40％。

杀灭土壤线虫微生态菌制剂的制备方法包括下述步骤：

1.将保存的各斜面菌种活化，分别摇瓶培养。巨大芽孢杆菌和细黄链霉菌都用可溶性淀粉培养基培养，培养基：pH7.0～7.5，121℃高压灭菌20-30分钟；巨大芽孢杆菌，35～40℃培养20～24小时；细黄链霉菌，28～30℃培养36～50小时。

2.用玉米淀粉培养基，一级液体扩大培养巨大芽孢杆菌与细黄链霉菌；接种量5％～10％。

3.用玉米淀粉培养基，二级液体扩大培养巨大芽孢杆菌与细黄链霉菌；接种量5％～10％。

4.以麦麸为载体分别固体扩大培养并固定化于麦麸上。麦麸灭菌前加入10％玉米淀粉的培养液，固体扩大培养条件：30～37℃，不断搅拌并通入净化的空气。

5.将巨大芽孢杆菌与细黄链霉菌经30～45℃温热风干燥，然后粉碎。

6.将吸附于麦麸上的巨大芽孢杆菌与细黄链霉菌混合，各菌组分的重量百分比为：巨大芽孢杆菌60％～80％，细黄链霉菌20％～40％。

本发明的有益效果

1)复合菌固定化于麦麸上，使每克复合菌制剂的有效菌菌落数(CFU)可高达100个亿，几乎达到了最大可能数，至今还未见如此高含菌量菌制剂的报道.麦麸不仅能为所培养菌提供一些营养成分，还由于其网状结构，具有较大的比表面积，所以能在单位体积内附着吸附固定化较多的菌体。所以，有效菌一旦施入土壤可以很快形成优势菌群，发挥杀灭线虫的作用，杀灭率接近100％。还有杀灭或驱除蛴螬(金龟子的幼虫)的作用，杀灭率或驱除率达95％以上。

2)土壤线虫的肠壁细胞含有较多的几丁质，而巨大芽孢杆菌能分泌较多的几丁质酶。所以，土壤线虫一旦遇到巨大芽孢杆菌，由于其肠壁遭到巨大芽孢杆菌几丁质酶的破坏，最后必死亡。巨大芽孢杆菌还具有把土壤固定化的磷转化为可溶性磷的作用，可溶性磷是植物和微生物可利用的磷。

细黄链霉菌，能产生抗生素抗病驱虫，分泌刺激素，促进植物生长，转化矿物质。

二者相互配合，不仅杀虫驱虫而且促进、修复土壤生态系统平衡。

具体实施方式

实施例1

按下列步骤进行：

1)将4℃保存的各斜面菌种活化，分别摇瓶培养。巨大芽孢杆菌和细黄链霉菌都用可溶性淀粉培养基培养，具体配方如下：可溶性淀粉20g，KNO₃ 1g，NaCl 0.5g，K₂HPO₄ 0.5g，MgSO₄.7H₂O 0.5g，FeSO₄ 0.01g，蒸馏水1000mL，pH7.2，121℃高压灭菌20分钟。巨大芽孢杆菌，37℃培养24小时；细黄链霉菌，30℃培养48小时。

2)一级液体扩大培养(巨大芽孢杆菌与细黄链霉菌分别单独扩大培养，培养基用玉米淀粉，培养条件同上)；接种量5％。

3)二级液体分别扩大培养，培养基和培养条件同上；接种量5％。