[发明专利]一种山楂精降脂胶囊含量测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种山楂精降脂胶囊含量测定方法。

背景技术

山楂精降脂胶囊为山楂精降脂片的改剂型品种，原山楂精降脂片为中华人民共和国卫生部部颁标准第9册收载的品种，由山楂水解提取物组成，具降血脂作用。原标准项下收载的含量测定方法是：以槲皮素为对照，通过与亚硝酸钠、硝酸铝和氢氧化钠溶液显色后，采用分光光度法，在510nm处测定总黄酮含量。但在实际测定中发现，原测定方法，测定依据不合理，无法准确测定供试品的含量。其理由有3点，(1)槲皮素对照品溶液显色后，在510nm处无吸收，而供试品溶液有吸收，但吸收峰在480nm处。以无吸收峰的做对照，测定有吸收峰的含量，测定的结果是没有任何参考价值的(见图1、2、3、4)。(2)510nm是紫红色的吸收区，样品和对照品加碱后，样品为紫红色的，对照品为黄色的，在可见光区，以黄色做对照，测定紫红色，从另一方面又说明了方法的欠科学性。(3)原含量测定方法样品是以乙醇为提取溶剂，取2.0ml置10ml量瓶中，加水及水系显色试剂至刻度，脂溶性成分析出，溶液变浑浊，影响吸收度。所以说原测定方法，无法准确测定供试品的含量。

发明内容

通过对提取溶剂、显色条件、测定波长的探讨研究，提供一种以槲皮素为指标，316nm为检测波长，低浓度乙醇为样品提取溶剂，测定总黄酮的科学、准确、重现性好、灵敏度高的含量测定方法。解决了原测定方法，槲皮素对照品吸收度不随浓度成比例增长，只能达到0.56的弊端，使其吸收度落在方法学规定的范围之内；线性相关系数由原方法γ＝0.9723，提高到γ＝0.9997；加样回收实验结果表明：回收率为99.75％(见附表1)。方法的灵敏度是原方法的5倍以上。

准确测定方法提供了正确的含量限度，由原方法规定的毫无根据的每片或粒不得低于4.5mg，修订为不得低于0.90mg。真正起到了科学、准确控制制剂质量的作用。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案为：

1.对照品溶液的制备精密称取在干燥器中干燥24小时的槲皮素适量，加乙醇配置成原液，再取一定量原液，加30～60％的乙醇稀释成每ml含槲皮素0.03～0.07mg的溶液；

2.标准曲线的制备精密吸取对照品溶液1.0，2.0，3.0ml分别置25ml量瓶中，依次加30～60％乙醇使总量为5ml，摇匀，依次加5％亚硝酸钠溶液1ml，摇匀，放置6分钟，再分别加10％的硝酸铝溶液1ml，摇匀，放置6分钟，分别加入氢氧化钠试液10ml，加30～60％乙醇至刻度，摇匀，避光放置15分钟，以相应的溶剂和试剂为随行空白，照分光光度法(中国药典2005年版一部附录VB)，迅速在316±2nm波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程；

3.测定法取样品10粒，倾出内容物，精密称定，研细，取0.03～0.5g，置具塞锥形瓶中，精密加30～60％乙醇25～50ml，密塞，称定重量，回流10～30分钟，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，再用0.45μm微孔滤膜滤过，精密量取续滤液1～5.0ml，置25ml量瓶中，照标准曲线制备项下的方法，自加“加30～60％乙醇使总量为5ml”起，依法测定吸收度，用回归方程，计算供试品中槲皮素的含量。

本发明的原理如下：

以槲皮素为对照，通过与亚硝酸钠、硝酸铝和氢氧化钠溶液显色后，槲皮素对照品与供试品溶液在316±2nm处都有吸收峰，而且其含量与吸收强度符合比尔定律。

本发明的创新点及有益效果如下：

(1)首次发现与亚硝酸钠、硝酸铝和氢氧化钠溶液显色的槲皮素与总黄酮其共有吸收峰在316±2nm处，并非文献报道的510nm处。

(2)以低浓度乙醇取代乙醇作为样品的提取溶剂，解决了原方法样品溶液加水及水系显色试剂后，溶液变浑浊，影响吸收度，使原方法失去准确性的弊端。

(3)检测波长和提取溶剂的改进，有效提高了方法的准确性、灵敏度、重现性和线性范围。彻底解决了原测定方法，槲皮素对照品含量不随浓度成比例增长的弊端(其吸收度在0.196～0.56)，使其吸收度落在方法学规定的范围之内；线性相关系数由γ＝0.9723(见附表2、图5)，提高到γ＝0.9997(见附表3、图6)；方法的灵敏度是原方法的5倍以上。

(4)提取方式由原方法的索氏提取3小时，改为回流10分钟，缩短了时间，节约了试剂，提高了效率。