[发明专利]一种RNAi载体及其应用无效
| 申请号： | 200710064107.2 | 申请日： | 2007-02-28 |
| 公开（公告）号： | CN101058819A | 公开（公告）日： | 2007-10-24 |
| 发明（设计）人： | 蒋宇扬;谢振华;马伟伟;李文鹏 | 申请（专利权）人： | 清华大学深圳研究生院 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;A61K48/00 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 | 代理人： | 关畅 |
| 地址： | 518055广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 rnai 载体 及其 应用 | ||
1、一种RNAi载体，是在含有多克隆位点的载体骨架中，含有CMV增强子和tRNAlys启动子的重组载体，所述CMV增强子在载体中位于tRNAlys启动子的上游；所述CMV增强子的GenBank号为2828971，tRNAlys启动子的GenBank号为140508。
2、根据权利要求1所述的RNAi载体，其特征在于：用于构建所述含有CMV增强子和tRNAlys启动子的重组载体的出发载体为pCMV5。
3、根据权利要求2所述的RNAi载体，其特征在于：所述载体中还包含有PBR322复制起点和氨苄青霉素抗性基因。
4、根据权利要求3所述的RNAi载体，其特征在于：所述含有CMV增强子和tRNAlys启动子的重组载体为pExsiler。
5、一种构建权利要求4所述的RNAi载体的方法，包括以下步骤：
1)以pCMV5质粒载体为模版，在由序列表中序列1和序列2组成的引物对的引导下PCR扩增含有CMV增强子的DNA片段；
2)以Hela细胞基因组DNA为模版，在由序列表中序列3和序列4组成的引物对的引导下PCR扩增人源tRNAlys启动子；
3)将步骤1)扩增的DNA片段与步骤2)扩增的人源tRNAlys启动子连接，得到RNAi载体pExsiler。
6、权利要求1或2或3或4所述的RNAi载体在制备抑制靶基因表达的基因治疗性药物中的应用。
7、根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述靶基因为癌基因、转录因子基因或生长因子基因。
8、根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述靶基因为POKEMON基因。
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