[发明专利]一种苏云金芽孢杆菌工程菌UV173A及其制备方法和应用

说明书

技术领域：

本发明涉及一种生物工程菌，特别是涉及一种广谱杀虫活性的苏云金芽孢杆菌工程菌及其制备方法。

背景技术：

苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis，简称Bt)是一种分布极其广泛的革兰氏阳性细菌。在形成芽孢的同时，能产生由一种或几种杀虫晶体蛋白组成的伴孢晶体(parasporalcrystal)。这种杀虫晶体蛋白(Insecticidal Crystal Proteins，ICPs)又称δ-内毒素(delta-endotoxin)，对人畜无害，不污染环境，因而Bt在害虫的生物防治中得到了最广泛的应用。

迄今为止已有人从不同的Bt菌株中克隆了378种杀虫晶体蛋白基因，根据杀虫晶体蛋白氨基酸的同源性，可将他们分为53大类，分属160种模式基因(http://www.biols.susx.ac.uk/home/Neil_Crickmore/Bt/)。其中，cry1类基因的表达产物对鳞翅目昆虫有特异的杀虫活性，其蛋白分子量为130～140kD，用胰蛋白酶处理可生成60kD的毒性核心片段(Whiteley，H.R.And Schnepf，H.E.，The molecular biology of parasporal crystalbody formation in B.thuringiensis，Annu.Rev.Microbiol.，1986，40：549)，Cry1Ba蛋白对小菜蛾具高毒力。cry3A基因对鞘翅目昆虫具有特异毒性，该基因编码65kD的蛋白，可不依赖于芽孢萌发形成晶体，在昆虫中肠液的作用下，被降解为55kD的毒性多肽(Krieg A，HugerAM，Langenbruch G A，et al.1983 Bacillus thuringiensis var.tenebrionis：ein neuer gegenuberlarven von Coleopteren wirksamer pathotyp.Z.Ang.Entomol.，96：500-508)。

国内外已有人利用生物工程的方法，构建了一些苏云金芽孢杆菌工程菌。如美国Ecogen公司首次利用质粒结合转移等细胞工程手段构建了含有cry3B和cry1Ca基因、对鳞翅目和鞘翅目害虫有活性的Bt工程菌(Sick，A.et al.1990.Nucleotide sequence of acoleopteran-active toxin from a new isolate of B.t.subsp.tolworth.Nucl Acids Res.18；Entwistle，P.F.，1993.An Environmental Biopesticide：Theory and Practice.Wiley Chichester Press.U.K.125-146.)。美国Mycogen(Frank.H.Gaertner.et al.Bacillus thuringiensis isolate.US Patent，NO.4910016.Mar.20，19907.)公司和Sandoz(Dimitri-Karamata.et al.Insecticidal hybrid bacteriafrom B.t.subsp.kustaki and B.t.subsp.tenebrionis.US Patent NO.4797279.Jan 10，1989.)公司用上述同样的方法研制出MT104和B-18013，分别用于粉纹夜蛾、甜菜夜蛾和马铃薯甲虫的防治。

目前世界上防治鳞翅目和鞘翅目害虫所使用的Bt制剂杀虫谱较窄、品种单一、害虫易于产生抗性，而且已经发现在田间小菜蛾对商品化的Bt制剂产生了抗性，因此延缓害虫抗性的产生、拓宽Bt制剂的杀虫谱逐渐成为人们的研究重点(Tabashnik B E，1994.evaluationof resistance to Bacillus thuringiensis.Annu.Rev.Entomol..，39：47-79.)。