[发明专利]中药等天然产物混合物药物筛选备选库的制备方法及其应用

权利要求书

1.天然产物混合物药物筛选备选库的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

(a)、取初级原料，回流提取，合并提取液，浓缩得提取物浸膏；

(b)、称取所得浸膏，双蒸水悬浮，用有机溶剂萃取，分离有机溶剂相和水相；合并水相，备用；合并有机溶剂萃取物，蒸除有机溶剂，得到干膏状有机溶剂相成分，备用；

(c)、蒸除步骤(b)得到的水相中的有机溶剂，用大孔树脂柱层析分离，用水为流动相洗脱，弃去水洗部分；再用乙醇溶液洗脱；将乙醇溶液洗脱部分蒸除溶剂，得干膏状样品备用；

(d)、上述步骤(b)中制得的干膏状有机溶剂相部分、步骤(c)中制得的干膏状样品分别为制得的天然产物混合物备选库的备选样品，所有初级原料制得的每种备选样品即组成天然产物混合物药物筛选备选库。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

步骤(a)中：

用乙醇溶液回流提取，所用乙醇溶液与初级原料的质量比为6∶1-12∶1；

对于初级原料为中药处方的提取物浸膏的制备，则按照处方中规定的药材种类和1-6倍按照处方中规定的用量组成初级原料，分别用70％-95％乙醇按上述同样的方法制得浸膏一；另外，同样则按照处方中规定的药材种类和1-6倍用量组成初级原料，用水煎煮，煎煮液合并，浓缩得浸膏二；浸膏一和浸膏二都作为中药处方的提取物浸膏进行下一步的处理；

对于初级原料为微生物的提取物制备，将含有适量微生物的培养液过滤，得到固体微生物菌丝体和培养液滤液，培养液滤液保留；菌丝体超声破碎，过滤，滤液浓缩得浸膏，此浸膏与培养液滤液都作为微生物的提取物进行下一步的处理；

步骤(b)中：

萃取用有机溶剂为乙酸乙酯或氯仿；

对于微生物提取物的培养液滤液部分直接用有机溶剂萃取，合并每次有机溶剂萃取物，蒸除有机溶剂，得到干膏状有机溶剂相成分，备用；

步骤(c)中：

依次用水、50％乙醇、95％乙醇为流动相洗脱。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：

步骤(a)中：

用70％-95％乙醇回流提取2-4次，每次1-3小时；

对于微生物的提取物制备中，是将菌丝体用60-90％丙酮超声破碎；

步骤(b)中：

浸膏与悬浮用双蒸水的质量比为1∶5-1∶15；萃取用有机溶剂的体积与悬浮用水的体积比为6∶1-10∶1；

步骤(c)中：

水洗脱6-10次，50％乙醇和95％乙醇各洗脱4-6次；洗脱用水为2-4倍体积量的步骤(b)中悬浮用水量，洗脱用50％乙醇和95％乙醇量分别为2-4倍体积量的步骤(b)中悬浮用双蒸水量。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：

步骤(a)中：用乙醇浓度为95％乙醇，回流提取次数3次，每次2小时；对于中药处方的提取物浸膏二的制备中，是用双蒸水煎煮3次，每次1-3小时，煎煮液合并，浓缩得浸膏二；对于微生物的提取物制备，是菌丝体用80％丙酮超声破碎20-60分钟；

步骤(b)中：浸膏与悬浮用双蒸水的质量比1∶10；萃取用有机溶剂的体积与悬浮用双蒸水的体积比为8∶1；萃取用有机溶剂为乙酸乙酯，萃取4-6次，萃取时需充分振摇，静置5-8小时分层；对于微生物提取物的培养液滤液部分则直接用适宜量有机溶剂萃取4-6次，合并每次有机溶剂萃取物，蒸除有机溶剂，得到干膏状有机溶剂相成分，备用；

步骤(c)中：所述的洗脱用水、50％乙醇、95％乙醇量分别为3倍体积量的步骤(b)中悬浮用双蒸水量；

步骤(d)中：上述步骤(b)中制得的干膏状有机溶剂相部分、步骤(c)中制得的水相大孔树脂50％乙醇洗脱部分和水相大孔树脂95％乙醇洗脱部分得到的干膏分别组成天然产物混合物备选样品。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的制备方法，其中所述的初级原料选自以下述的任一种或几种：传统药材、按中药处方规定的药材种类和用量组成的混合药材、还未进行药用开发的动植物品种、海洋生物、微生物。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其中所述的传统药材包括：《中药药典》、《中华本草》、《中国植物志》收录的中药材品种、藏药。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的制备方法制备得到的天然产物混合物药物筛选备选库。