[发明专利]一种饲用活菌酸制剂及其专用菌株

说明书

技术领域

本发明涉及一种饲用活菌酸制剂及其专用菌株。

背景技术

随着人民生活水平的提高和对环保意识的加强，对畜产品品质和动物饲养卫生环境的要求越来越高，传统的饲用抗生素添加剂正在逐步被禁止或限制使用，2006年1月，欧盟已经正式决定禁止在畜禽饲料中添加促生长用的抗生素。随后日本、韩国等亚洲发达国家也制定了相应的限制动物产品抗生素残留的政策法规。

寻找抗生素替代物，减轻抗生素禁用对畜禽生产带来的负面影响是各国畜牧业迫切需要解决的问题。国内外众多报道认为，微生态制剂、酸化剂、中草药饲料添加剂、饲用酶制剂、功能性寡糖等可作为抗生素的替代产品，但是由于养殖环境差，酸化剂添加剂量不够，益生菌在肠道内活力不高，实际生产中往往不能完全取代促生长抗生素。复合几种替代品，寻求高活力、耐逆境的微生态制剂，利用其抗菌肽的强大杀菌能力来替代抗生素目前仍然欠缺。

酸化剂、活菌制剂不能完全替代饲用抗生素。酸化剂在猪的应用效果显著，尤其是对断奶仔猪，能弥补胃酸分泌不足的缺陷，激活蛋白酶活性，促进营养物质消化吸收，可作为抗生素替代物的首选产品，但是作为替代品，添加量必需要大，受日粮的缓冲能力影响也较大，生产实践中无法添加大剂量的酸化剂。益生素作为替代品，其劣势在于活菌制剂易失活、不耐胃的酸性环境、难以在胃肠道菌群中处于竞争优势。

由于受国情的约束，动物饲养的环境条件比较差，我国目前绝大部分的畜禽饲养还离不开抗生素，畜禽产品中抗生素残留比较高，基本不能出口，严重制约了畜牧业的健康发展，所以开发生产能替代抗生素的高效安全饲料添加剂不仅可以提高畜禽品质，而且对于改善生态环境，实现畜牧业持续健康发展都是很有意义的。

发明内容

本发明的目的是提供一种饲用活菌酸制剂及其专用菌株。

本发明所提供的饲用活菌酸制剂的专用菌株是枯草芽孢杆菌枯草亚种(Bacillus subtilis subsp.subtilis)Gendone-01，已于2007年02月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市海淀区中关村北一条13号)，保藏登记号为CGMCC No.1946。

枯草芽孢杆菌枯草亚种(Bacillus subtilis subsp.subtilis)Gendone-01CGMCC No.1946，是从北京顺义某养殖场土壤中分离得到的。具体方法如下：从北京顺义某养殖场的不同地点取土壤12份，每个土样均在2-3克左右。分别加入到100ml无菌生理盐水中，振荡混合1分钟，然后静置5分钟。各取1ml上清液，分别加入到10ml无菌培养液A中(每升培养液A含有：葡萄糖5.0克、蛋白胨5.0克、牛肉膏3.0克、酵母粉1.0克、MgSO4·7H₂O 0.5克、MnSO4·H₂O 0.005克，pH 7.0)，同时各加入4种指示菌培养液各1ml(4种指示菌分别为：金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureusIVDC C56005；鼠伤寒沙门氏菌Salmonella typhimurium IVDC C79-13；大肠杆菌K88E.coli IVDC C83901；大肠杆菌K99E.coli IVDC C83529)。在37℃混合培养48小时(60rpm低速转动)，然后将培养液置于80℃水浴中保温10分钟，杀死营养细胞。用无菌生理盐水将处理后的培养液稀释10000倍，取稀释液0.5ml均匀涂布在固态培养基B(在培养液A中加入1.8％琼脂)上，37℃静置培养48小时，挑选其中最大的单菌落，转接在斜面试管中，在4℃保存。最终筛选出性状优良的枯草芽孢杆菌枯草亚种(Bacillus subtilis subsp.subtilis)，实验室命名为：Gendone-01(保藏登记号：CGMCC No.1946)。

综合枯草芽孢杆菌枯草亚种(Bacillus subtilis subsp.subtilis)Gendone-01CGMCC No.1946的形态特征、生理生化特性和16SrDNA序列分析的结果，将其鉴定为枯草芽孢杆菌枯草亚种(Bacillus subtilis subsp.subtilis)。具体鉴定结果如下：

(1)菌体的形态特征

革兰氏染色阳性，细胞形状为杆状，细胞直径小于等于1μm，形成芽孢，芽孢不膨大，芽孢非圆形，不形成伴孢晶体。

(2)生理生化特性