[发明专利]一种甘蓝枯萎病的生防制剂及其制备方法和专用菌株

说明书

技术领域

本发明涉及一种甘蓝枯萎病的生防制剂及其制备方法和专用菌株。

背景技术

植物病害是农业生产中重要的自然灾害之一，其对全球农作物产量造成的损失达13-20％。真菌所引致的植物病害占所有植物病害的80％以上，许多重大病害对农业生产造成的损失惨重，如作物的白粉病、锈病、灰霉病、稻瘟病、枯萎病和疫病等。其中由镰刀菌引致的蔬菜枯萎病，是一个具有潜在危险的流行病害，曾在新世纪初毁灭了北京的大兴冬瓜专业村；镰刀菌引起的黄瓜枯萎病的猖獗也使京郊黄瓜种植面积在近年减少了近2/3；同一类病原引起的甘蓝枯萎病，也是由镰刀菌侵染所致，这种病原菌可在土壤中长期存活，垂直分布可达80～100厘米深度，很难根除，并且正以每年面积扩大10倍的速度发展蔓延，为害严重的地块造成了绝产。目前枯萎病的控制主要是通过化学农药处理土壤或利用抗病品种来防治，但效果均不理想。土壤在使用化学农药熏蒸消毒过程中，有益微生物群被杀死，破坏了土壤的微生物区系和微生态平衡。就甘蓝枯萎病而言，目前尚无生产中理想的抗病品种，因此该病的防治主要依赖于化学农药。长期大量应用化学农药，不但污染环境、破坏生态平衡，而且也导致病原生物抗药性的产生，致使病害再度猖獗且更难防治。微生物农药源于自然，具有环境兼容性好、持效期长、低毒、对人畜和天敌安全等特点，同时其资源丰富，是植物尤其是果蔬病害控制的重要绿色环保途径之一，符合可持续农业发展的要求。因此，近年微生物农药在全球范围内得到了迅速发展。

发明内容

本发明的目的是提供一株新的枯草芽孢杆菌，该菌株经过发酵培养后的菌剂和代谢产物对枯萎镰刀病菌具有强烈的生长抑制作用，通过发酵培养的菌剂及无菌滤液可作为抗甘蓝枯萎病的生防制剂，用于植物土传真菌病害的生物防治。

本发明所提供的枯草芽孢杆菌，是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B03，该菌株已于2007年03月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市海淀区中关村北一条13号)，保藏号为CGMCCNo.1983。

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B03 CGMCC No.1983，是从北京郊区种植蔬菜的土壤中分离得到的。具体方法如下：从北京郊区蔬菜田采集土样，取10g加入内装100ml无菌水和玻璃珠的三角瓶中，于100转/min摇床上振荡20min，取0.5ml加入4.5ml无菌水中，再依次稀释10^-2，10^-3，10^-4倍，分别取各稀释土壤悬液0.1ml在PDA平板上均匀涂布，超净工作台内吹至略干；每浓度3个重复，置于28℃恒温箱中培养5-10天，挑取细菌单菌落进行稀释划线分离纯化。以镰刀枯萎菌等病原真菌为靶标菌，利用平板对峙培养法进行拮抗菌的初筛；对初筛获得的有拮抗性的菌株进行摇瓶发酵培养，并分别获得发酵菌液和发酵液经0.45μm的无菌微孔滤膜过滤除菌获得无菌发酵滤液；进一步测试发酵菌液和无菌发酵滤液对病原菌菌丝生长、孢子萌发的抑制作用和温室防病效果，最终筛选出性状优良的生防菌株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B03 CGMCC No.1983。

综合枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B03 CGMCC No.1983的形态学特征和生理生化特性的结果，将其鉴定为枯草芽孢杆菌。具体鉴定结果如下：

(1)菌体的形态特征

革兰氏染色阳性，细胞形状为杆状。

(2)生理生化特性

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B03 CGMCC No.1983的生理生化特性如表1所示。

表1.枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)B03 CGMCC No.1983的生理生化特性