[发明专利]6′－O－咖啡酰基熊果甙的制备方法

说明书

技术领域：本发明涉及化学领域化合物的分离提取方法，具体的涉及植物天然生理活性物质6′-O-咖啡酰基熊果甙的制备方法。

背景技术：6′-O-咖啡酰基熊果甙为熊果甙衍生物，化学名称为对羟基苯基6′-O-反式-咖啡酰基-β-D-葡萄糖甙(p-hydroxyphenyl-6′-O-trans-caffeoyl-β-D-glucopyranoside)。该化合物最初从山龙眼科银桦属植物或哈克木属植物的叶中分离得到，对皮肤具有脱色素作用，为水溶性的配糖体类化合物，极性大，分离纯化困难，现有技术的制备该化合物的方法存在分离纯化过程繁琐，得率低等问题，迄今没有工业化批量生产该化合物的制备工艺。

发明内容：本发明的目的旨在提供一种成本低、得率高、纯度高、制备过程简单易行、生产周期短，易于批量制备和工业化生产6′-O-咖啡酰基熊果甙的制备方法。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

6′-O-咖啡酰基熊果甙(6′-O-caffeoyl-arbutin)的制备方法，取忍冬科荚蒾属植物或杜鹃花科熊果属植物或越桔属植物或山龙眼科银桦属植物或哈克木属植物或鹿蹄草科鹿蹄草属植物任一种，烘干、粉碎，用含水甲醇或乙醇加热回流提取，或用含水丙酮冷浸提取，提取液经过滤、浓缩、脱脂，残留水液进一步浓缩去除部分水后，室温或4-10℃低温放置析出沉淀，过滤，干燥，得6′-O-咖啡酰基熊果甙粗品；滤液经大孔吸附树脂柱层析分离，用含水乙醇或甲醇梯度洗脱，收集含有6′-O-咖啡酰基熊果甙的洗脱液，浓缩干燥，得6′-O-咖啡酰基熊果甙粗品，粗品进一步重结晶，得6′-O-咖啡酰基熊果甙纯品。

上述技术方案中用于提取6′-O-咖啡酰基熊果甙的植物原料为：忍冬科荚蒾属植物，如：浙皖荚蒾(Viburnum wrightii)，小叶乌饭(V.carlesii)，荚蒾(V.dilatatum)等；杜鹃花科熊果属植物，如：Arctostaphylos canescens，A.columbiana，A.nevadensis，A.patula，A.viscida等，越桔属植物，如：越桔(Vaccinium vitis-idaea)，笃斯越桔(V.uliginosum)，樟叶越桔(V.dunalianum)等；山龙眼科银桦属植物，如：银桦(Grevillea robusta)等，哈克木属植物，如：荣华木(Hakea saligna)等；鹿蹄草科鹿蹄草属植物，如：日本鹿蹄草(Pyrolajaponica)，圆叶鹿蹄草(P.rotundifolia)等。使用的植物部位包括上述植物的叶、芽、茎、枝、花、果实、种子或全草。

上述技术方案中用于柱层析分离的大孔吸附树脂为聚苯乙烯型大孔吸附树脂。可以是：如：SEPABEADS SP825(SP850，SP70，SP207，SP700)，MCI gel CHP20P(75-150um)，Diaion HP20(HP20SS)，XAD-2，XAD-4，D-101，KB-8等。提取物与大孔吸附树脂的重量比为1∶8-15，柱径高比为1∶10-15。

上述技术方案中的重结晶步骤是将6′-O-咖啡酰基熊果甙粗品用适量水加热溶解后，室温或4-10℃低温放置过夜，将析出的结晶或沉淀用水反复洗涤，或再次进行重结晶，过滤，干燥，得到纯度大于90％的6′-O-咖啡酰基熊果甙纯品。

上述技术方案中6′-O-咖啡酰基熊果甙的干燥方法可用加热干燥、冷冻干燥、喷雾干燥或微波干燥。

经过上述制备工艺提取分离6′-O-咖啡酰基熊果甙，操作简单可行，产品收率高，纯度大于90％，无有机溶剂的残留，可直接用作为制药或化妆品的天然原料。

本发明制备6′-O-咖啡酰基熊果甙的具体步骤如下：

(1)植物原料去杂、洗净、烘干、粉碎成粗粉(过20-40目筛)。

(2)将该植物粗粉用80％含水低级醇(可以是甲醇或乙醇)加热回流提取2-3次，每次提取时间为2-3小时，或用80％含水丙酮冷浸提取3-4次，每次提取时间为2-5天，过滤、合并滤液，浓缩、回收溶剂。

(3)残留水溶液经过滤脱脂，再进一步浓缩去除部分水后，室温(或4-10℃低温)下放置析出沉淀，过滤沉淀，干燥得到6′-O-咖啡酰基熊果甙粗品。