[发明专利]一种铁皮石斛茎尖组培快速繁殖的育苗方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种铁皮石斛茎尖组培快速繁殖的育苗方法，属于生物工程技术领域。

背景技术

石斛是我国传统名贵中药，分为铁皮、黄草、金钗、霍山、环草、马鞭等数十个品种，其中铁皮石斛(Dendrobium candidum Wall.ex Lindl)是石斛中的极品，主要分布于江南和西南各省。铁皮石斛具有滋阴清热、生津益胃、润肺止咳等功能，用于热病伤津、口干烦渴、病后虚热等多种病症。现代药理学研究表明，铁皮石斛所含的多糖具有抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫力和扩张血管等作用。铁皮石斛多生悬崖峭壁上，由于种子极小、无胚乳，自然条件下萌发需与某些真菌共生，自然繁殖率低，且我国多年来对铁皮石斛的采集量远大于其生长量，由于长期采挖，自然资源枯竭，已濒临绝迹，被国家列为重点保护的野生药材品种。为保护这一珍稀中药品种，国内许多科研人员对铁皮石斛进行了快速繁殖技术的研究，但大多研究集中在由野生种子萌发形成愈伤组织、原球茎，然后进行分化培养获得再生苗。这些技术存在培育周期长、成本高等缺点。因此，如何缩短组培苗的培育周期，成为铁皮石斛实现人工规模化栽培的关键。

发明内容

为克服现有技术存在的上述缺陷，本发明提供一种铁皮石斛茎尖组培快速繁殖的育苗方法。

本发明按以下技术方案完成：一种铁皮石斛茎尖组培快速繁殖的育苗方法，其特征在于经过下列工艺步骤：

A、圆球茎诱导培养

选取健壮的野生铁皮石斛苗，用其茎尖或芽尖作为外植体，先用流水冲洗干净，再用70％的乙醇溶液消毒30～60秒，用无菌水冲洗一遍，把材料放入瓶子中，用浓度为0.1％的升汞浸泡6～10min，然后用无菌水冲洗4～5遍，接种于下列无菌诱导培养基中：B₅+KT1.5～2.0mg/L+NAA0.4～0.8mg/L+浓度为10～15％的香蕉汁，在温度25-28℃、光照强度1800～2000lx、光照时间为12个小时的条件下，培养55～65天，即可形成圆球茎；

B、圆球茎增殖培养

将生长良好的圆球茎转接入下列增殖培养基中：B₅+NAA1.5～2.0mg/L+KT0.8～1.0mg/L+浓度为10～15％的马铃薯汁，进行增殖培养，培养的环境条件为：温度25-28℃，光照强度2000～2200lx，光照13小时，培养周期为35-45天；

C、圆球茎分化培养

将圆球茎转入下列分化培养基中：B₅+NAA0.8～1.0mg/L+KT0.1～0.5mg/L+浓度为10～15％的香蕉汁，控制温度25-28℃，光照强度2000～2200lx，光照时间12小时，培养55～65天，得到分化苗；

D、壮苗和生根培养

将分化苗转入下列生根壮苗培养基中：B₅+NAA1.0～1.5mg/L+浓度为10～15％的香蕉汁，控制温度25-28℃，光照强度1800～2000lx，光照时间12小时，培养35～45天，得到生根苗，即可出瓶炼苗、移栽。

本发明具有下列优点和积极效果：

(1)本发明缩短了铁皮石斛苗的培育周期，从圆球茎至生根苗的培育周期仅为5～6个月，大大降低了生产成本。

(2)本发明采用茎尖组培技术培育的石斛苗，遗传性状稳定，其多糖和石斛生物碱含量与野生铁皮石斛相近。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明做进一步描述。

实施例1