[发明专利]一种多肽及其编码基因与应用

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种多肽：人酪氨酸酶抗原表位区基因表达相关蛋白tyrC及其编码基因，以及这种多肽在鉴定白癜风患者血清中自身抗体中的应用。

(二)背景技术

人酪氨酸酶(tyrosinase，TYR)是黑素合成过程的关键酶，是一种分子量为75kD的含铜蛋白，一部分以胞内的膜结合酶形式存在，其余的以膜可溶形式存在。酪氨酸相关蛋白1(TRP-1)和酪氨酸相关蛋白2(TRP-2)与TYR结构相似，其基因产物的氨基酸序列相同为40％，分子量几乎相同，三级结构有高度保守序列半胱氨酸残基，具有酶活性铜结合位点，含有跨膜区。TYR、TRP-1和TRP-2作为自身抗原在白癜风的自身免疫发病机制中起着至关重要的作用，可刺激机体产生异常升高的抗酪氨酸酶自身抗体。

白癜风是黑素细胞破坏所致的皮肤色素缺失性疾病，白癜风患者遍布世界各地，约占世界人口的1～2％。我国如以1％计算，约有1000多万白癜风患者，该病对美容所造成的损害严重影响了患者的心理健康和正常社交活动及就业选择，降低了患者的生活质量，部分人甚至因患该病而轻生。目前由于该病发病机制尚未明确，治疗困难。近年来的大量研究表明白癜风患者的发病很大部分与自身免疫功能紊乱密切相关，而且白癜风患者血清黑素细胞抗体滴度与该病活动性和严重程度密切相关。研究认为白癜风患者血清黑素细胞抗体滴度与该病活动性和严重程度密切相关，50％局限性白癜风患者血清有抗黑素细胞的抗体，泛发性白癜风则高达93％，而TYR自身抗体尤为重要。

国外学者对白癜风抗体的研究采用了很多不同的方法，尤其对白癜风自身相关抗原TYR，TRP-1和TRP-2进行了大量研究。Song等^[7]应用免疫印迹法检测白癜风患者血清有61％的抗酪氨酸酶抗体阳性，Okamoto等^[8]研究表明白癜风患者血清中抗酪氨酸酶相关蛋白-2有67％的阳性率，表明酪氨酸酶相关蛋白家族很可能是与白癜风病情相关的重要抗原。

国内有学者采用免疫组化方法对白癜风患者、非白癜风患者和健康人血清对抗黑素细胞抗体进行了检测，受检查的20例白癜风患者中，有13例出现阳性结果，阳性率为65％。并且有学者对TRP-1的一段cDNA序列进行了基因克隆，表达及纯化，并利用其表达产物制备TRP-1B细胞表位区的多克隆抗体。

Kemp等应用放免法鉴定了人酪氨酸酶的B细胞表位，它们分别位于该蛋白的240-255，289-294，295-300，435-447，461-479位氨基酸处，其中289-300位表位区含有TYR-1的305-317位及TYR-2的301-314位表位区的同源氨基酸序列。人全长酪氨酸酶由于分子量较大，表达难度增加，直接表达抗原表位肽，其分子量小，结构简单，去除了非抗原表位区，有较高的特异性和敏感性。

如上所述，人酪氨酸酶是白癜风患者血清中产生自身抗体的重要抗原，因而本领域中一直需要制备一种更有效的能够鉴定白癜风患者血清中自身抗体的人酪氨酸酶抗原表位区基因表达相关蛋白。

(三)发明内容

本发明既是为了提供一种能有效鉴定色素性皮肤病酪氨酸酶抗体尤其是鉴定白癜风患者血清中自身抗体的多肽：人酪氨酸酶抗原表位区基因表达相关蛋白tyrC及其编码基因，以及这种多肽在鉴定白癜风患者血清中自身抗体中的应用。

为达到发明目的本发明采用的技术方案是：

一种多肽：人酪氨酸酶抗原表位区基因表达相关蛋白tyrC，含有与SEQNO：1所示氨基酸同源性为95～100％的氨基酸序列。