[发明专利]胆红素测定冻干校正液及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种胆红素测定冻干校正液，同时，本发明还涉及一种胆红素测定冻干校正液的制备方法。

背景技术

胆红素的测定是检验医学中最常用的肝功能项目之一，在临床上它是诊断黄疸的存在以及其类别的重要手段和依据，使用频率很高。胆红素有四个组分：即未结合胆红素、单葡萄糖醛酸结合胆红素和双葡萄糖醛酸结合胆红素，及与白蛋白共价结合的胆红素称为δ-胆红素。通常我们把四个组分的总体，称总胆红素，把后三者称为直接胆红素。直接胆红素中的前二者又称作结合胆红素。

测定胆红素的方法很多，其中最常用的有重氮试剂法、化学氧化法和酶法。这三种方法均采用分光光度法的原理，都用校正液作定量的依据。回顾校正液的历史，在上一世纪的50-60年代，曾经摹仿测量反应生成的颜色(红色)用色素、染料人工配成近似的比色系列，用肉眼或比色计测定。随着测定技术的进步，开始用自然存在的胆红素做成的溶液做成校正液(水溶液)。由于胆红素的不稳定性，这种校正液只能一次性使用，且由于胆红素的四个组分都各自有自己的的光学特征，共同只用此同一个校正液不尽合理。大概在80年代之后，出现用DTB(二牛磺酸胆红素)用作于直接胆红素的校正液。目前，市场上许多同类产品或是多种校正品复合，或是总直胆红素分开，与人体血清中胆红素的存在形式有差异，均不具备与人体内的一致性。

近20年多随着自动化生化技术的快速发展，测定胆红素的校正液也发展很快，能和自动生化仪测胆红素配套使用的出现二种剂型：一种是不冻的，一种是冻干型。前者呈液体状态，能在低温下保持一定时间的稳定，但在夏天在运输过程容易很快变质。而冻干型产品也只是具备生物材料一经冻干就自然稳定的水平，但残留水分高，一经复溶，出现浑浊，效价速降。因此，长期以来，在胆红素测定领域，人们期盼有一种稳定化、经济的产品的问世。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中的不足，提供一种接近人体血清中胆红素的存在形式、与人体内血清胆红素具有一致性，稳定化、经济的胆红素测定冻干校正液。

本发明的另一目的在于提供一种胆红素测定冻干校正液的制备方法，该方法浓缩冻干血清的液量，减少了常规冻干过程的一半液量，制备出的胆红素测定冻干校正液残留水分低，性能更稳定。

本发明的胆红素测定冻干校正液，原料组成为：去除脂蛋白的健康人血清92～98份、间接胆红素2～8份、直接胆红素8～20份、动物血清白蛋白1000～50000份、抗氧化剂10～100份、络合剂50～500份、防腐剂0.1～10份、赋形剂1000～50000份，以上均为重量份素数。其中优选去除脂蛋白的健康人血清94～98份、间接胆红素3～5份、直接胆红素11～13份、动物血清白蛋白3000～10000份、抗氧化剂15～25份、络合剂150～300份、防腐剂0.3～7份、赋形剂2000～40000份，以上均为重量份数。进一步优选去除脂蛋白的健康人血清96份、间接胆红素4份、直接胆红素12份、动物血清白蛋白3500份、抗氧化剂20份、络合剂200份、防腐剂0.5份、赋形剂3000份，以上均为重量份数。

本发明所述间接胆红为间接反应胆红素，所述直接胆红素为直接反应胆红素，所述动物血清白蛋白为牛血清白蛋白，所述抗氧化剂为二巯基苏糖醇(DTT)、N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)、盐酸联氨(H₂N·NH₂·2HCL)中的一种或几种；所述的络合剂为乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na₂)、乙二醇双(2-氨基乙基)醚四乙酸(EGTA)、氨三乙酸(NTA)中的一种或几种；所述防腐剂为抗菌素、柳硫汞、PC-300(通用商品名，市面有售)中的一种或几种；所述赋形剂为乳糖。

校正液的基质，就是基础物质，水溶液，生理盐水，人工蛋白质溶液，动物血清，混合的健康人血清均可作冻干血清的基础原料。业内公认；只有采用健康人的混合血清作原料，基质效应最小，最安全，最符合标本检测中的一致性的原则。我们的基质完全合格。采用除去血清中固有的脂蛋白的血清，使冻干品复溶后呈澄清透明状态。这样不仅降低了校正液的空白吸光度，还减少了干扰，更重要的是还原了人血清的透明原貌。

由于血清中失去了脂蛋白导致白蛋白总量不足，为此我们添加动物血清白蛋白，如牛血清蛋白，可使澄清血清中白蛋白的含量达到常人的低水平，从而有利于胆红素的稳定。

本校正液添加间接反应胆红素和直接反应胆红素制成总/直胆红素混合校正液，最接近人体血清中胆红素的存在形式。