[发明专利]表皮短杆菌ZJB－07021及其在制备(S)－2,2－二甲基环丙烷甲酰胺中的应用

权利要求书

1.表皮短杆菌ZJB-07021(Brevibacterium epidermidis ZJB-07021)，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期2007年6月8日，保藏编号CCTCC M.207076。

2.如权利要求1所述的表皮短杆菌ZJB-07021，其特征在于所述表皮短杆菌ZJB-07021菌落特征如下：30℃培养40h，在牛肉膏蛋白胨平板培养上的菌落呈圆形，直径1毫米，隆起形状为凸镜状，淡黄色，边缘整齐，光滑，菌落随时间的延长而增大，数天后直径可达5mm以上；20h培养物的细胞呈杆状，0.6～1.2μm×1.5～3.0μm；无芽孢形成，不运动；培养时间延长，菌体逐步变短，老培养物变成球状；革兰氏阳性，接触酶阳性，硝酸盐还原弱阳性，吐温40、吐温80、L-树胶醛糖、D-阿拉伯糖、D-果糖、七叶苷、甘露醇、甘露糖、D-洛酮糖、松二糖、D-木糖、羟基丁酸、琥珀酸甲酯、丙酮酸甲酯、丙三醇利用为阳性；菊糖、β-葡糖醛酸酶、α-葡萄糖苷酶、N-乙酰基-D-葡萄糖、海藻糖、山梨醇、木糖醇、松三糖、甘露醇、水杨苷、脲酶、葡萄糖、核糖、乳糖、蔗糖、肝糖原产酸、明胶液化、水苏糖、麦芽糖、丙二酸盐利用为阴性。

3.如权利要求1或2所述的表皮短杆菌ZJB-07021在微生物制备(S)-2，2-二甲基环丙烷甲酰胺中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述的应用为：以外消旋2，2-二甲基环丙烷甲酰胺为底物，加入表皮短杆菌ZJB-07021湿菌体细胞，25～45℃下、于pH6.5～9.0的缓冲液中反应1～4小时，反应液经分离纯化得到(S)-2，2-二甲基环丙烷甲酰胺。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述反应在pH6.5～7.8的磷酸盐缓冲液中进行。

6.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述反应在pH7.4～9.0的Tris-HCl缓冲液中进行。

7.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述反应体系中还添加有体积为缓冲液体积3～10％的共溶剂，所述共溶剂为下列之一：①甲醇、②乙醇、③乙酸乙酯、④丙酮、⑤正丙醇、⑥异丙醇、⑦乙腈。

8.如权利要求4所述的应用，其特征在于：所述反应体系中，表皮短杆菌ZJB-07021湿菌体细胞的初始浓度为80～300g/L，底物外消旋2，2-二甲基环丙烷甲酰胺的初始浓度为5～15g/L。

9.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述表皮短杆菌ZJB-07021湿菌体细胞由如下方法制备得到：培养基终浓度组成：葡萄糖10.0～20.0g/L，酵母粉13.0～18.0 g/L，KH₂PO₄0.5～2.0g/L，K₂HPO₄0.5～2.0g/L，NaCl1～3g/L，乙酰胺5～11.0g/L，pH6.0～8.5；接种表皮短杆菌ZJB-07021，20～35℃、100～300rpm振荡培养48～72小时，将菌体离心经生理盐水洗涤，收集得湿菌体细胞。

10.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述应用如下：

(1)培养基终浓度组成：葡萄糖15g/L，酵母粉14.5g/L，KH₂PO₄1.0g/L，K₂HPO₄1.0g/L，NaCl1.0g/L，乙酰胺5.6g/L，pH6.0～8.5；摇瓶装液量30％，接种表皮短杆菌ZJB-07021，于20℃、100～300rpm振荡培养72h，将菌体离心经生理盐水洗涤，收集得湿菌体细胞；

(2)取50mM pH7.8的磷酸盐缓冲液，加入步骤(1)所得湿菌体细胞至细胞浓度为200g/L，并加入底物外消旋2，2-二甲基环丙烷甲酰胺至底物浓度为10g/L，35℃恒温水浴摇床振荡反应2小时，反应结束后将反应液离心，取上清液，加入等体积的乙酸乙酯萃取，得S-(+)-2，2-二甲基环丙甲酰胺。