[发明专利]复合保护剂及其用途

说明书

技术领域

本发明属于胶体金免疫检测试纸产品保藏的辅助剂范围，特别涉及一种用于氯霉素速测金标试纸条的复合保护剂。

背景技术

金免疫层析技术是胶体金标记技术和蛋白质层析技术相结合的以微孔滤膜为载体的快速固相膜免疫分析技术，现已广泛应用于生物医学、动植物检疫、食品安全监督等诸多领域。20世纪90年代以来，胶体金免疫层析快速诊断试纸条(简称金标试纸条)的研究发展迅速，大多用于检测各种病原菌、人体微量蛋白、抗体等生物大分子物质，也有一些用于检测小分子物质，如滥用药物、毒品、兴奋剂等。此外，金标试纸条以其简便、快速、准确和无污染的特点，在农产品安全质量监控领域中日益发挥出显著优势，它不仅适用于专业人员大规模地对农产品中药物残留进行现场监测和筛检，也适用于农产品行业个体户、企业乃至家庭进行自检，可见有着广阔的应用前景。

目前，市售兽药、农药残留检测的金标试纸条比较少见，究其原因主要有：胶体金免疫层析分析作为一种新型的快速诊断技术，用于检测兽药、农药小分子化合物的研究尚且不多；出于商业保密，国内外对金标试纸产品保藏的辅助剂报道也较少；金标试纸条的可靠性和持效性，涉及到膜固相上结合的蛋白质类物质的稳定性问题，这也是该类检测产品商业化发展的主要瓶颈之一。

近些年来，随着蛋白质制品的稳定性研究逐步深入，国内外报道指出常见的蛋白质保护剂有以下几类：多羟基化合物、糖类、氨基酸、聚合物、异源蛋白质及表面活性剂。这些保护剂对蛋白质的稳定机制比较复杂，目前报道较多的是关于它们在蛋白质冷冻干燥过程中保护作用的机制研究。尤其在干燥及贮藏过程中，环境条件易引起蛋白质变性失活，添加一些辅料可稳定蛋白质结构。用来解释此干燥保护机制的假说主要有两种：“玻璃态”假说和“水替代”假说，其推论依据都是基于药液实现了部分或全部玻璃化固定，且辅料分子与蛋白质药物形成氢键，使其在缺水状态下仍能维持活性结构。一个优良的蛋白质保护剂应具备多种保护特性，如玻璃化温度高、吸湿性差、结晶率低和不含还原基，但任何单一保护剂都不可能包含所有的保护特性，因此要使用两种或多种保护剂才能获得更显著的保护效果。

当前，氯霉素残留问题仍受到人们的高度重视，研发稳定可靠、灵敏度高的氯霉素速测金标试纸条有着深远的实际意义。氯霉素属小分子化合物，采用竞争性金免疫层析法进行诊断，故检测试纸条上含有的主要生化试剂是：结合垫上包被的抗氯霉素单克隆抗体-胶体金标记物(简称金标抗体)，硝酸纤维素膜(NC膜)测试带(T带)上包被的氯霉素-卵清蛋白偶联物和质控带(C带)上包被的羊抗鼠IgG。这些物质尤其是抗体分子的稳定性，很大程度上决定了试纸条的货架寿命。抗体属热敏性蛋白，其失活速度直接决定于暴露温度，因而研究稳定蛋白的方法和测量试纸条的货架寿命，即保持最初活性90％的持续时间，很是重要。对该试纸条添加辅助剂，即是改善上述三类蛋白质的稳定性能，以保护各自在膜固相上的活性结构，从而解决氯霉素金标试纸条的保存期问题。

目前现有的氯霉素速测金标试纸条在0～4℃保存期一般为3～12个月，尚不能完全满足生产的需要。

关于氯霉素金标试纸条研制的专利已有一些，但都未涉及产品保护剂的内容；其次，在小分子化合物速测金标试纸的同类产品中，尚未对保护剂问题进行报道；再者，国外有学者提出单一保护剂用于大分子物质诊断的金免疫测试条，但对于不同保护剂组合的协作效应没有指明。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种成本较低、使用方便的复合保护剂，使用该复合保护剂能使氯霉素速测金标试纸条在0～4℃保存期延长至2年以上。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种复合保护剂，是由糖类、高分子聚合物、蛋白质和防腐剂溶解在缓冲溶液中形成的溶液，糖类、高分子聚合物、蛋白质和防腐剂在所述溶液中的浓度分别是1～20g/100mL、0.05～2.0g/100mL、0.1～2g/100mL和0.005～0.1g/100mL。

作为本发明的复合保护剂的改进：糖类为蔗糖和海藻糖中的至少一种，高分子聚合物为聚乙烯吡咯烷酮(PVP，40000)、聚乙二醇(PEG，20000)和吐温(Tween20)中的至少一种，蛋白质为牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)中的至少一种，防腐剂为叠氮钠和硫柳汞中的至少一种。