[发明专利]一种增强抗菌肽在植物体内表达的丰度和稳定性的方法

权利要求书

1.一种增强抗菌肽在植物体内表达的丰度和稳定性的方法，包含以下步骤：A)以特征序列为MASERQALMLILLTTFFFTIKPSQA的大豆几丁质酶信号肽为引导肽，引导目标蛋白定向积累于细胞壁和细胞间隙；B)以特征序列为SNAADEVATPEDVEPG的多肽为连接肽，连接多个抗菌肽串联融合表达，表达后于S↓NAADEVATPE↓DVEPG位点剪切为多个抗菌肽单元；C)根据目标植物密码子使用频率对编码序列进行优化；D)将引导肽、抗菌肽、连接肽组合成引导肽+抗菌肽+(连接肽+抗菌肽)*N的结构形式将抗菌肽串联融合表达，提高抗菌肽表达效率和稳定性，N为任意拷贝数。

2.根据权利要求1所述的增强抗菌肽在植物体内表达的丰度和稳定性的方法，其特征在于所述的多拷贝抗菌肽融合表达包含以下步骤：A)在引导肽+抗菌肽的融合基因末端设计Bgl II+终止密码+Xba I或其它切点，克隆构建Destination Vector，B)在连接肽+抗菌肽的融合基因头部加BamH I切点，尾部加Bgl II+终止密码+Xba I或其它切点(同A步骤的末端设计)，克隆构建EntryVector；C)将Entry Vector的目标序列用BamH I和Xba I切下，连接于Destination Vector用Bgl II和Xba I酶切产生的载体臂，以所得新的载体为Destination Vector将Entry Vector目标片段反复连接进入Destination Vector，直至获得所需抗菌肽基因拷贝数。