[发明专利]阪崎肠杆菌选择性分离培养基

说明书

技术领域

本发明涉及培养基，更具体地，涉及阪崎肠杆菌选择性分离培养基。

背景技术

阪崎肠杆菌为革兰氏阴性无芽孢杆菌，有周生鞭毛，能运动。婴幼儿常因食用了阪崎肠杆菌污染的奶粉而引起感染，临床表现为脑膜炎、败血症、坏死性结肠炎等症状，死亡率较高。

目前用于分离阪崎肠杆菌所用的培养基是行业标准SN/T1632.1-2005或美国FDA推荐的VRBGA，阪崎肠杆菌在VRB GA平板上可长成两种菌落，一种是易未接种环移动的典型的光滑型菌落，另一种是干燥型或黏液状菌落，但大部分生长成黏液状、周边有胆汁酸沉淀的红色菌落。同时部分其他肠杆菌科细菌在VRBGA上也能长成与阪崎肠杆菌相似的菌落，从而不易区分。

阪崎肠杆菌有α-D-葡萄糖苷酶活性，利用这一特点在基础培养基中加入5-溴-4氯-3-吲哚-α-葡萄糖苷可制成显色选择性培养基。阪崎肠杆菌在显色培养基上长成蓝绿色菌落，但研究表明其他细菌也能在显色培养基上长成有颜色的菌落，例如金 黄色葡萄球菌、单增李斯特氏菌、无害李斯特氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌呈兰色或兰紫色；肺炎克雷伯氏菌肺炎亚种菌落中心呈蓝绿色；泛菌属的菌落与阪崎肠杆菌几乎不能区分。另据报道，伤口埃希氏菌、克氏柠檬酸杆菌在显色培养基上长成蓝绿色菌落；非脱羧勒克氏菌菌落中心呈蓝色。可见单靠显色剂也不能达到区分阪崎肠杆菌和其他杂菌的目的。

发明内容

本发明目的在于克服现有培养基(例如VRBGA)对阪崎肠杆菌没有选择性或选择性差；阪崎肠杆菌在其中蔓延生长成黏液状而不利于可疑菌落的分离；检测时间长，工作效率低等缺点。

为解决上述问题，本发明提供了一种阪崎肠杆菌选择性分离培养基，所述培养基由基础培养基、抗生素和显色剂组成，其中所述基础培养基由以下组分组成：脑心浸粉33.0-43.0g、氯化钠4.0-6.0g、琼脂1.0-2.0g和水1000mL。

优选所述基础培养基由以下组分组成：脑心浸粉38.0g、氯化钠5.0g、琼脂1.5g和水1000mL。

其中所述抗生素为万古霉素、头孢噻吩或二者的组合。优先所述抗生素为万古霉素和头孢噻吩的组合。

其中所述显色剂为5-溴-4氯-3-吲哚-α-D葡萄糖苷。

本发明还提供了一种阪崎肠杆菌选择性分离培养基，所述培养基由以下组分组成：脑心浸粉33.0-43.0g、氯化钠4.0-6.0g、琼脂1.0-2.0g、万古霉素3.0-5.0mg、头孢噻吩0.08-0.15mg、5-溴-4氯-3-吲哚-α-D葡萄糖苷0.08-0.50g和水1000mL

更优选所述培养基由以下组分组成：脑心浸粉38.0g、氯化钠5.0g、琼脂1.5g、万古霉素4.0mg、头孢噻吩0.1mg、5-溴-4氯-3-吲哚-α-D葡萄糖苷0.10g和水1000mL。

本发明阪崎肠杆菌培养基相对于VRBGA培养基具有以下优势：

(1)选择性高

用10株非阪崎肠杆菌和阪崎肠杆菌对本发明阪崎肠杆菌培养基的研究结果表明，本发明阪崎肠杆菌培养基具有高选择性，其中除产气肠杆菌外，其他9株非阪崎肠杆菌均未生长，产气肠杆菌虽有生长，但菌落呈土黄色，很容易将其与阪崎肠杆菌菌落容易区分开来。

(2)能抑制阪崎肠杆菌的过度生长

SN/T1632.1-2005或FDA推荐用VRBGA来分离阪崎肠杆菌，但该培养基含有酵母粉、蛋白胨和葡萄糖等成分，营养非常丰富，阪崎肠杆菌在其中疯狂生长成片状，常掩盖共存的杂菌，不利于可疑菌落的分离，易导致下一步鉴定的失败。而本发明阪崎肠杆菌培养基营养适中，且包含适当浓度的抗生素，能抑制阪崎肠杆菌的过度生长且不影响其检出水平，菌落大小适度，菌落形态规则，菌落之间有明显间隙，便于挑选。

(3)缩短了检测时间，提高了工作效率

SN/T1632.1-205标准检测方法需依次经过无菌水预增菌、EE肉汤增菌、VRBGA平板分离、革兰氏染色、氧化酶实验、TSA平板确认、生化鉴定等步骤，全过程至少需要9天时间。这是因为VRBGA分离培养基的选择性太低，需依次将非阪崎肠杆菌排除，才能进行后面的实验，不然会造成过高的实验成本及工作量。而用本发明阪崎肠杆菌培养基进行检测，因选择性大大提高，样品经过无菌水预增菌、EE肉汤增菌以及接种到所述培养基上，即可直接挑选出蓝绿色菌落同时进行生化鉴定、革兰氏染色、氧化酶实验、TSA显色实验，全过程只需5天时间。

具体实施方式

实施例