[发明专利]一种纯化制备爱啡肽的新工艺

说明书

技术领域

本发明涉及医药化工领域，具体涉及一种应用高速离心分离色谱法 (FCPC)制备高纯度爱啡肽的新工艺。

背景技术

爱啡肽(Eptifibatide)是一种含有巯基丙酰及六个氨基酸残基的环 状多肽，分子式为C₃₂H₄₉N₁₁O₉S₂，是血小板糖蛋白GPIIb/IIIa受体拮抗剂， 可阻断由各种激活剂引起的血小板聚集反应，是已知最强的特异性血小板 聚集抑制剂，主要用于防止心肌供氧动脉闭塞，心脏病发作，不稳定性心 绞痛、无Q波心肌梗塞、冠脉介入治疗引起的猝死。

该多肽经过多步合成、氧化、裂解工序，带有大量的难溶性杂质，使 得该产品粗品前处理非常的困难，人工合成粗品的溶解性非常差，制约了 反相纯化时的上样量，合成的裂解工艺中使用了大量的TFA，在纯化中必须 去除，在样品前处理时如果加入大量的有机溶剂，反相纯化多肽样品难于 吸附上固定相，达不到分离的目的。

目前采用的纯化制备方法是用反相高压液相色谱法分离纯化得到的。 该方法优点是简单、通用，适合于大多数的多肽纯化，但缺点是不容易实 现大规模生产，且生产设备十分昂贵，投入非常的大。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种应用高速离心分离色谱法(FCPC)制备 高纯度爱啡肽的新工艺，不需要固体填料，采用两相互不混溶的溶剂体系 在色谱柱管中的接触，由于离心力的作用，其中一相停留在色谱柱内，成 为固定相，另一相被泵到色谱柱中，称之为流动相。待分离的组分由于在 两相里不同的分配系数K′，达到分离的目的。由于不使用类似反相HPLC的 固体硅胶填料，因而没有不可逆吸附，具有样品无损失，无污染，快速高 效和适合大规模生产的优点。

本发明的实现方法是：在样品前处理时可加入多种的有机溶剂，其溶 剂体系由A、B、C三个组分组成，A组分可以是氯仿、二氯甲烷、四氯化碳、 乙酸乙酯、石油醚；B组分可以为甲醇、乙醇、乙腈、丙酮；C组分为水， 体积比为2-4：1-3：2-6。经过一次分离，有70％的目标肽色谱纯度大于98％， 剩下纯度不够的经再次回收纯化。

经过高速离心分离色谱法(FCPC)制备的爱啡肽以TFA盐的形式存在， 还需要将其转换成醋酸，TFA在经过离子交换树脂时得以去除。其工艺步骤 为：

a、将人工合成的爱啡肽粗品用选定的溶剂溶解；

b、将溶解好的爱啡肽粗品经过高速离心分离色谱(FCPC)分离纯化， 紫外检测器于230nm处监测，分段收集目的峰；

c、将收集的馏分用HPLC检测，纯度大于98％的馏分合并，待下一步 处理，纯度小于98％的馏分再次回收纯化；

d、将纯度合格的馏分经过离子交换，去除三氟乙酸(TFA)，转换成 醋酸爱啡肽，达到药用级标准。

本发明的优点在于：

1、用高速离心分离色谱法(FCPC)分离纯化爱啡肽，由于没有使用小 颗粒的反相硅胶填料，溶解样品可以加入有机溶剂，降低了样品前处理难 度，更有利于工业化规模生产。

2、由于没有硅胶的吸附，减少了样品的损失及被污染的几率。

3、应用离子交换树脂去除TFA的同时转换成了醋酸盐，方便，快捷， TFA的残留低于0.25％。

具体实施方式

下面以实例对本发明做进一步详细说明：

实施例一：

采用Pi1ot-Scale制备型高速离心分离色谱仪(FCPC)，溶剂选用二氯 甲烷-乙腈-水体系制备爱啡肽。首先以2：1：3的体积比将上述溶剂体系 配置于分液漏斗中，摇均后静置分层。将上下层分开，取上相为固定相， 下相为流动相。取爱啡肽粗品100克，溶解在1升上述混合体系中，用0.45um 的有机相滤膜过滤，待纯化。采用法国Kromaton制备型高速离心分离色谱 仪，转子体积5升，先用固定相充满整个柱子，调节主机转速到1000rpm， 以150ml的流速将流动相泵入柱内。待整个体系平衡后，通过泵将溶解好 的样品注入色谱柱内，然后根据检测器紫外谱图分段接收目标成分。收集 馏分经过HPLC检测，纯度大于98％的馏分合并，待下一步处理，纯度小于 98％的馏分需要再次回收处理。