[发明专利]一种从植物提取物中筛选或检测抗菌活性物质的方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然物质的生物活性成分，具体而言涉及从植物提取物中筛选或检测抗菌活性物质的方法。

背景技术

目前，由于人们大量滥用抗生素类药物以及各种原因，使得菌株产生了很强的耐药性，抗生素的使用也受到了很大的限制。由于天然抗生素类药较传统抗生素具有毒副性小，抗菌性高，菌株对它的耐药性性低的优点，因此，从天然资源中寻找新的抗生素将成为寻找新的抗生素类药物的一条出路。中国具有用植物药和它的各个部位来治疗疾病的传统，植物药资源丰富，产生的次生代谢物又多，其中有的可用来治疗细菌性疾病。因此，我们可以从天然植物中寻找新的抗细菌类药物。由于植物资源很庞大，进行筛选时比较困难，采用传统的筛选方法费时而低效。

根据检索结果，目前涉及从天然植物中寻求具有抗菌活性成分的专利仅有200610023110.5号“一种具有广谱抗菌活性的植物挥发油及其制备方法、用途”，该专利仅涉及某种特定的植物。迄今为止，尚无从植物提取物中筛选或检测抗菌活性物质的方法的专利申请件。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从植物提取物中筛选或检测抗菌活性物质的方法，从而为新的抗菌性药物的研究开发提供便利。

发明人提供的从植物提取物中筛选或检测抗菌活性物质的方法，关键的步骤为：(1)制备植物提取物，或在此基础上建立提取物库，或通过各种分离提纯手段得到的组分或成分；(2)按照不同细菌或真菌的培养条件进行培养；(3)将每种待测样品加入细菌或真菌培养液；(4)在细菌或真菌培养条件下培养12～24小时进行培养；(5)在每个培养液中加入刃天青指示剂；(6)根据刃天青的颜色变化判断细菌的存活，由此判断该植物提取物组分或成分是否有抑菌活性。

本发明所述的抗菌活性包括对细菌或真菌有抗菌作用。

上述第一步中，植物提取物可以为各种溶剂提取的，也可以是通过各种分离纯化方法得到的组分或单一成分；待测样品可为少量或大量的筛选，若为大量的筛选，则可采用高通量筛选技术进行筛选，在高通量的抗菌活性筛选中，所用的微孔板为常用的96孔板。

上述第二步至第四步中，所述的细菌培养条件和培养方法均为常规的细菌培养方法。

上述第五步中，所述的刃天青是作为筛选具抗菌活性实验的指示剂，可从市场购买，如美国Sigma公司。

上述第六步中，孔中的细菌或真菌是活的，即样品没有或只有极弱的抑菌活性，则呈粉红色或红色；而孔中的细菌或真菌是死的，即样品有或有较强的抑菌活性，则呈蓝色。

发明人指出，以上6步骤所观察到的抗菌结果，可进一步通过OD₆₀₀确定提取物的抑菌活性：呈粉红色或红色的孔OD₆₀₀在0.10～1.00之间；呈蓝色的孔OD600在1.00之上；该检测结果还可通过琼酯法加以验证。

验证方法所述的琼酯法是常规琼酯法，可根据不同的细菌或真菌选择不同的培养基。

发明人指出，高通量筛选技术是将多种技术方法有机结合而形成的新的技术体系，它以分子水平和细胞水平的实验方法为基础，以微板形式作为实验工具载体，以自动化操作系统执行实验过程，以灵敏快速的检测仪器采集实验数据，以计算机对实验获得的数据进行分析处理，在同一时间内对数以千、万计的样品进行检测，并以相应的数据库支持整个技术体系的正常运转。

发明人还指出，刃天青指示剂一般用于检测细菌存在与否、菌落多少的指示剂，如在链球菌，变形链球菌，乳酸杆菌，放线菌等中的运用；而在植物提取物抑菌活性成分的检测或筛选中至今尚未应用。由于刃天青指示剂颜色变化明显，易于用肉眼观察，作为筛选具抗菌活性实验的指示剂，较其他颜色指示剂，如甲基橙、酚酞、罗丹明B等，有自己独特的优势。刃天青在该方法中的运用，使得该方法简便、快速。

本发明的从植物提取物中筛选或检测抗菌活性的方法，可筛选植物提取物，也可筛选经分离后的组分或成分。该方法操作简便，所需实验器材简单，工作量少；同时得到的实验结果也很明显。本发明方法简单易行，可以快速筛选出具有抗菌活性的植物提取物，并从中快速筛选抗菌活性组分与成分，为药物的研究提供基础，为人类的健康服务；也可用于植物抗菌活性成分的检测。

具体实施方式

实施例1  163种植物提取物的筛选

(1)建立提取库：取163种植物的提取物，将每种植物原料2g分别用研钵和研棒捣碎，再加入8ml 50％乙醇，每一种提取液要求在6号组织培养皿中振摇24小时，以便从滤纸中滤过；然后将过滤液冷冻干燥16～24小时后成粉末；通过冷冻干燥法得到的干提取物在100μl 50％乙醇液中呈悬浮状；建立起163种植物的提取物库。