[发明专利]一种肠出血性大肠杆菌O157:H7基因工程疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药生物技术领域，转别涉及一种多价融合型肠出血性大肠杆菌O157:H7基因工程疫苗及其制备方法。

背景技术

肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC)是出血性肠炎的主要病原体，其主要血清型是O157:H7。该菌被确认为致病菌的20多年来世界各地包括中国都有不同规模的暴发流行。EHEC O157:H7感染可使人患腹泻、出血性结肠炎(hemorrhagic colitis，HC)，还可在5％～10％的病例中引发溶血性尿毒综合征(hemolytic uremic syndrome，HUS)及血栓性血小板减少紫癜(thrombotic thrombocytopenic purpura，TTP)等严重并发症，严重者可导致死亡。EHEC O157:H7的感染因具有暴发流行趋势、强烈的致病性与致死性以及抗生素治疗可能会加剧病情等特点，已经成为全球性的公共卫生问题。目前，对O157:H7感染尚缺乏有效的防治方法，只能给予对症治疗和适当的抗菌治疗。由于O157:H7的暴发流行和治疗上的困难，疫苗研究就显得极为紧迫。有效的疫苗研制是预防和治疗O157:H7感染最简单、经济、快捷的手段。

O157菌的致病性主要体现于细菌的粘附定植力和细菌毒素两个方面。紧密粘附素(Intimin)是该菌重要而且特异的粘附分子，intimin及其受体(转位紧密粘附素受体Tir)介导细菌粘附于肠上皮细胞，引起肠上皮细胞粘附和擦拭性(attaching and effacing，A/E)损伤。Intimin的胞外区(C-端片段)是与Tir受体结合的功能区，现有实验结果已经证明intimin尤其是C-端片段(Intimin-C)的特异性抗体可以阻断细菌的粘附进而使其丧失致病力，因而具有较强的免疫保护性(1.Dean NEA和Gansheroff L J，Mills M.Infect Immun2002，70(5)：2414；2.Li Y和Frey E，Mackenzie AM.Infect Immun 2000，68(9)：5090)。EHEC O157:H7的III型分泌系统(type III secretion system，TTSS)相关蛋白EspA(Esp为E.coli secreted protein缩写)与粘附和擦拭性损伤形成的信号传递有关，EspA形成的纤维样管状结构是其他效应蛋白进入宿主细胞的通道，EspB，EspD经过此通道分泌到宿主细胞，并在细胞膜表面形成小孔，Tir蛋白经过此通道及小孔插入宿主细胞，Intimin与Tir结合造成A/E损伤。研究证明EspA具有良好的免疫原性和免疫保护性，EspA是表面表达和多聚体形式存在，抗EspA抗体常比其他表面蛋白的抗体存在的数量多、持续时间长；又因EspA的高度保守性，抗EspA抗体可以提供多种血清型广泛交叉的保护作用(1.Crepin VF和Shaw R，Abe CM.Journal of Bacteriology 2005，187(8)：2881；2.Gruenheid S和Sekirov I，Thomas NA.Mol.Microbiol，2004，51(5)：1233；3.Mundy R和Petrovska L，Smollett K.Infect Immun.2004，72(4)：2288；4.Potter AA和Klashinsky S，Li Y.Vaccine 2004，22(3-4)：362)。