[发明专利]人体内生长激素变异的检测方法、该变异及其应用

权利要求书

1.一种检测方法，用于检测可有效作为个体GH功能障碍指示物的GH1变异，这种检测方法包括步骤：

a)从个体中获得含有人GH1基因核苷酸序列的试验样本；及

b)将从试验样本中获得的序列与已知的人GH1基因标准序列进行比较，其中试验样本序列与标准序列的差异，指示存在可有效作为GH功能障碍指示物的变异(下文称“GH1变体”)，其中提供试验样本的个体符合以下标准：

(i)生长衰退，定义为一种生长模式[通过一系列身高测量来绘制的；Brook CDG(Ed)临床儿科内分泌学(Clinical PaediatricEndocrinology)第三版，第9章，p141(1995，Blackwell Scieace)]，其在标准身高记录纸上进行绘图时[Tanner等人，Arch Dis Child 45：755-762，1970]，预示该个体成年身高处于根据个体父母身高所估计的个体成年目标身高的范围之外；

(ii)身高增长速度低于该年龄的25％；

(iii)根据Tanner-Whitehouse度量法，与实龄相比骨龄延迟至少为两年；和/或

(iv)没有其它已知疾病可能产生上述标准(i)～(iii)包含的症状。

2.权利要求1的方法，其中与实龄相比骨龄延迟在2～4年范围内。

3.任一前述权利要求的方法，其中个体在标准生长激素功能试验中的结果正常。

4.任一前述权利要求的方法，其中检测方法包含任意一种能确定个体GH1基因序列的测序方法。

5.任一前述权利要求的方法，其中检测方法包含用(a)一种GH1基因特异性片段，即GH1基因特有的，其序列在GH基因簇的4种其它共生基因(非GH1基因)中没有发现的片段；和(b)一种或多种不能与GH基因簇的4种其它共生基因(非GH1基因)内同源旁侧区结合的GH1基因特异性引物，对个体的GH1基因进行PCR扩增。

6.权利要求5的方法，其中GH1基因特异性引物选自GH1F(5’GGGAGCCCCAGCAATGC 3’；-615至-599)和GH1R(5’TGTAGGAAGTCTGGGGTGC3’；+2598至+2616)。

7.任一前述权利要求的方法，其中检测方法包含对个体整个GH1基因进行PCR扩增和对个体GH1基因的重叠组成片段进行巢式PCR。

8.任一前述权利要求的方法，其中检测方法包含对GH1基因的全部或跨越基因座控制区域的基因组DNA的片段进行PCR扩增。

9.任一前述权利要求的方法，其中检测方法包含用DHPLC方法对个体GH1基因的全部或片段进行突变筛选。