[发明专利]免疫测定方法

说明书

本发明涉及免疫测定方法，其中将免疫反应性物质，通常为抗体加入到样本中以便检测可能包含在该样本中的指定分析物和/或对其定量。

在大部分情况中，用于免疫测定方法中的免疫反应性物质为特异性抗体。然而，如果抗体为所关注的分析物，那么也可以使用抗原。

在这两种情况中，所用的免疫反应性物质都能够通过例如形成抗体-抗原复合物而与所述的分析物发生特异性相互作用。例如，可以通过在指定时间内进行浊度测定来监测这类复合物(凝集)在样品中的形成。例如，通过浊度测定法测定的凝集程度为样品中分析物浓度的指征。

通常在分析前建立校准曲线或类似曲线并且使用在浊度测定过程中获得的值通过该曲线计算分析物的浓度。

有时在含有高浓度分析物的样品中观察到没有凝集发生或仅发生减少的凝集。如果将这类样品充分稀释，那么会发生正常的凝集。

在高分析物浓度下凝集的缺乏或减少称作前带效应或“钩形效应”并且与如下事实相关：例如在样品中过量的抗原导致形成小抗体-抗原-复合物，它们不会聚结而形成可见的凝集。一般而言，可以认为抗原的浓度与抗体的浓度相比越高，则观察到的信号越低。

当抗原的递增浓度超过了抗体群识别和结合的相对能力时，信号会衰减。这种效应是动态的并且代表了从抗原-抗体凝集物形成到非凝集化形式占优势的较高可能性之间反应平衡的改变。

已知的免疫测定法提供了鉴定产生前带效应的样品的不同手段。大部分已知的方法均使用在指定的时间内对样品进行浊度测定来建立反应动力学。例如，通过将在不同时间时从反应动力学中获得的值进行比较，能够推断样品中是否已经产生了前带效应。

用于检测前带效应的方法，例如披露在JP 2000221195、JP6213893或JP 6094717中，仅给出几个实例。

目前，免疫测定方法的方案提供了：将其中检测到阳性前带效应的样品(前带阳性样品)稀释，并且使用稀释的样品进行新的分析。然而，当分析物的浓度未知时，通常必须进行系列稀释以便找到指定样品的正确稀释比。这类系列稀释存在缺陷，因为它们需要时间来进行测试并且分析结果，还需要分析仪器的空间和另外的试剂和样品材料。

因此，本发明的目的在于提供简化对前带阳性样品的检验的方法。

该目的通过权利要求1的方法实现。

与已知的方法类似，本发明的方法也包括下列步骤：

-通过将样本与能够特异性结合分析物的免疫反应性物质，尤其是抗体混合制备测定样品；

-使样品于指定的反应时间内反应；

-例如，通过浊度测定法测定涉及免疫反应性物质与分析物在反应时间内的相互作用的信号；和

-基于不同的时间时测定的信号检查在样品中是否已经产生前带效应并且据此标记前带阳性的样品。

与已知的方法大不相同，本发明提供了将不同的校准曲线或单一校准曲线的不同部分用于计算分析物浓度，这取决于样品是否为前带阳性的。

与仅使用一种校准曲线的已知技术相比，本发明的方法使用了两种不同的校准曲线或系统，一种用于前带阳性样品，而另一种用于剩余的样品。

令人意外地发现，例如对含有高浓度的产生前带效应的分析物的样品进行浊度测定仍然可再现地产生在前带范围内的针对不同浓度的浓度依赖值。

因此，能够建立特定的校准曲线，它们至少能够对前带阳性样品中的分析物浓度进行近似的计算。

可以直接取用于前带阳性样品的通过本发明方法获得的浓度值或将它们用于计算正确的稀释比。

最好的是，本发明的方法避免了对前带阳性样品的再检验，例如，在其中近似的结果仍然可以满足试验的医学要求的情况下。如果认为再检验是必要的，那么对于前带阳性样品获得的浓度值是如此精确，以致于在不进行系列稀释的情况下将样品正确稀释到标准浓度范围是可能的。

本发明的方法仅需要例如选择正确的校准曲线用于计算分析物浓度。这是通过分析反应的动力学来完成的。这使得分析更为便捷。

本发明的免疫测定法适用于所有已知的使用和不使用粒子增强的凝集或血细胞凝集试验。

优选本发明的方法使用浊度测定技术来测定例如抗体与抗原之间的相互作用。然而，也可以使用能够对所述相互作用进行定量并且承担前带效应的其它技术，例如化学发光、酶免疫测定法、荧光或比浊法，仅给出一些实例。由于此原因，尽管本文主要涉及浊度测定，但是本发明不应限于应用这种技术。

可以通过本发明方法分析的典型的样本为，例如血液、血清或尿。一般而言，任何的体液或组织提取物均应被术语可以在免疫测定法中检验的样本所涵盖。

典型的反应时间在30秒到10分钟之间改变。