[发明专利]一种制备单克隆抗体的新方法

说明书

技术领域：

本发明是一种制备单克隆抗体的新方法，具体而言，就是用相关的多肽 来制备单克隆抗体的方法。

背景技术：

免疫反应是生物体对疾病具有抵抗力的重要因素。当动物体受抗原刺激后 可产生抗体。现有抗体制备技术是用抗原样品来反复的免疫动物，使免疫细胞 产生有效的抗体(免疫球蛋白)。绝大多数的脊椎动物体内包含多种类型的免疫 球蛋白，例如小鼠、大鼠和人体内都存在五种类型的免疫球蛋白：IgM，IgD， IgG，IgE和IgA。其中IgM和IgG是在可溶性抗原引发的免疫反应中起主导作 用的免疫球蛋白类型；本技术领域中实际所用的免疫球蛋白主要是IgG[Harlow， E.，and D.Lane..1999.(Eds.)Using antibodies：a laboratory press. Cold Spring Harbor laboratory Press，New York.pp 1-12.Stavnezer， Carayannopoloulos L.and Capra J.D.1993.Immunoglobulins：Structure and function.In Fundamental Immunology.Raven Press，New York.pp 283-314.]。 IgG家族又包含了四种IgG亚型：其中人体内为IgG1，IgG2，IgG3和IgG4；小 鼠体内为IgG1，IgG2a，IgG2b和IgG3。

多克隆抗体制备过程为注射抗原的方式多次免疫动物(比如小鼠，家兔和山 羊)，然后定期(通常在注射抗原几周之后)收集动物的血清或者腹水，这些血 清以及腹水中就含有目的抗原的抗体。抗体的特异性取决于抗原分子的决定簇 (抗原表位)，各种抗原分子具有很多抗原决定簇，因此，免疫动物所产生的抗 体实为多种抗体的混合物。蛋白抗原分子上的表位是由线形的氨基酸残基或者 非连续序列折叠形成的紧密三维结构，它们在抗原表面；线形的短肽序列组成 的抗原表位通常为6个氨基酸残基甚至更少[Harlow，E.，and D.Lane..1999. (Eds.)Using antibodies：a laboratory press.Cold Spring Harbor laboratory Press，New York.pp 1-12.]。

制备单克隆抗体的第一步是用相关抗原免疫动物，与制备多克隆抗体不 同的是，免疫动物之后取动物的脾细胞，再将能分泌抗体的脾细胞与骨髓 瘤细胞融合后，筛选能分泌目的抗体的杂交瘤细胞，并进行培养，收集它 们分泌的特异性抗体。多肽的稳定性影响着制备单克隆抗体的工作。

以常规的多肽制备单克隆抗体为例，为了得到比较纯的多肽，比较常用 的方法的是将目的抗原或者它的一个片断(半抗原)连接到载体上，例如 牛血清白蛋白(bovine serum albumin，BSA)，谷胱甘肽转移酶 (glutathione-S-transferase，GST)，人血清白蛋白(human serum albumin， HSA)等等，但这样得到的连接体往往形成大量的包涵体，极大地影响后 续实验的进行。

综上所述，为了不影响后续实验的进行，同时又能得到稳定的连接体， 采用一种更有效的方法来制备单克隆抗体，而本发明可以解决这个问题。

附图说明：

图1为用该方法制备得到的抗体免疫印记效果图；

图2为用该方法制备得到的抗体免疫组织化学效果图。

发明内容：

一种制备单克隆抗体的新方法，用多肽与特定的载体连接形成连接体， 再用连接体去对动物进行两次或两次以上的免疫，经过对多肽的多次免疫 应答，可以得到识别多肽抗原的脾细胞，再用脾细胞与骨髓瘤细胞杂交， 得到稳定表达多肽特异性抗体的杂交瘤细胞。

本发明的特征在于与多肽连接的载体构象稳定，疏水区较大且能在原核 细菌中大量表达。本发明应用范围非常广泛，理论上大多数多肽就可与此 载体连接来免疫动物获得相应的特异性抗体IgG。

具体实施方案：

实施例1：激素受体(Estrogen Receptor，ER)单克隆抗体的制备