[发明专利]基于线粒体DNA C3970T单核苷酸多态性检测高原肺水肿易感性的试剂盒

权利要求书

1.基于线粒体DNA C3970T单核苷酸多态性检测高原肺水肿易感性的试剂盒，其特征是该试剂盒包括以下分离包装的试剂：

试剂一，引物混合液，序列如下：

上游引物HP6-F：5’-ACGTTGCCGAAGGGGAGTCCGAACT-3’；

下游引物HP6-R：5’-GTTCAGGGGAGAGTGCGTCAAATGTTGTTC-3’；

试剂二，PCR反应混合液；

试剂三，3970位点单核苷酸多态性C对照DNA；

试剂四，3970位点单核苷酸多态性T对照DNA；

试剂五，探针混合液，三种探针序列如下：

①P6-F：

5’-GGCGAAGGGGCCTGCGGCGTATTCGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT-3’，为荧光物FAM标记；

②P6-D1：线粒体DNA的3970位点为单核苷酸多态性C：

5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGTGTAT TCGGCTATGAAGAATAG-3’；

③P6-D2：线粒体DNA的3970位点为单核苷酸多态性T：

5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGTGTATTCGGCTATGAAGAATAA-3’；

试剂六，连接反应混合液；

试剂七，电泳混合液。

2.根据权利要求1所述的基于线粒体DNA C3970T单核苷酸多态性检测高原肺水肿易感性的试剂盒，其特征是：

试剂一，引物混合液100μl；上游引物和下游引物各50μl混合，浓度均为10pmol/μl；

试剂二，PCR反应混合液1000μl；成分有1×PCR buffer，2.0mMMgCl₂，200mM dNTPs，1 U Taq酶，余量为蒸馏水；

试剂三，线粒体DNA的3970位点单核苷酸多态性C对照DNA 50μl，浓度为50ng/μl；

试剂四，线粒体DNA的3970位点单核苷酸多态性T对照DNA 50μl，浓度为50ng/μl；

试剂五，探针混合液120μl，三种探针各40μl混合，该三种探针浓度均为12.5pmol/ul；

试剂六，连接反应混合液100μl；成分有pH7.6的20mM Tris-HCl，25mM醋酸钾，10mM醋酸镁，10mM二硫苏糖醇，1mM氧化型辅酶I，0.1％TritonX-100，0.5μl Taq DNA连接酶，余量为蒸馏水；

试剂七，电泳混合液100μl；荧光物质1×ROX和上样缓冲液6×loadingbuffer各为50μl。