[发明专利]检测胃组织细胞中人VLDLR基因的失活的方法

说明书

技术领域

本发明涉及检测胃组织细胞中人极低密度脂蛋白受体(Very LowDensity Lipoprotein Receptor)(人VLDLR))基因的失活的方法。

背景技术

在日本，每年有100,000人以上会患上胃癌(Gastric Cancer，GC)，其中男性较多，男女比例为约2∶1，是男性中最多发的癌症。在日本每年的胃癌死亡人数约为50,000人，占全部因癌死亡人数的16％。根据迄今为止的研究，认为是胃组织细胞在细胞分化和增殖的过程中一连串地发生了基因的变化，其结果是最终导致了癌化。可是，还不明确到底是怎样的基因变化诱导了胃组织细胞的癌化。因此，现有状况是还不存在胃癌的检测方法和胃癌恶性程度的检测方法。

在胃癌的诊断中，使用的是例如胃X射线检查、胃内窥镜、血中胃蛋白酶原值、肿瘤标记，其中胃内窥镜(能够得到确诊的唯一检测方法)被广泛使用。可是，这些大多属于影像诊断、早期诊断的工具，并不是癌的确诊、分型、进度判定、有否转移的判定方法。

着眼于基因的胃癌的检测方法已知有例如专利文献1记载的方法。可是，该方法是着眼于基因表达谱(expression profile)变化的一种方法。基因表达谱的测定是多个mRNA量的测定，由于mRNA非常不稳定，容易分解，而且表达的动态范围(dynamic range)也比较大，所以通过微阵列(microarray)等测定的再现性就比较差。因此，需要一种更加稳定、再现性高的方法。

比较基因组杂交(Comparative Genomic Hybridization(CGH))是一种检测基因组中基因扩增的灵敏度高、效率优异的方法，本发明人采用该CGH阵列法鉴定了在胃癌细胞中扩增的基因群，即在染色体2p24.1扩增的SDC1基因、在染色体2p23.3扩增的DNMT3A基因、在染色体3p22.3扩增的MLH1基因、在染色体3p22.1扩增的CTNNB1基因等(非专利文献1)。

一般来说，基因水平上的癌化结构已经报道了如上所述的多个基因的扩增和癌抑制基因的缺失。在采用定位克隆等通常的方法的情况下，特定基因缺失的鉴定是非常费时费力的，很难发现目的基因。而且，即便是CGH法，采用通常的中期染色体的方法检测小于5-10Mb大小的基因组DNA的缺失也是非常困难的(非专利文献2和3)。通过染色体作图法(chromosome mapping)逐步缩小同源接合体缺失区域，最终鉴定出了目的癌抑制基因例如DPC4/SMAD4、RB1、PTEN、p16-INK4A、RASSF1等。

非专利文献1：Takada H，Imoto I，Tsuda H，Sonoda I，Ichikura T，Mochizuki H，Okanoue T，Inazawa J.：Screening of DNA copy-numberaberration in gastric cancer cell lines by array-based comparativegenomic hybridization.Cancer Sci.2005 Feb；96(2)：100-10

非专利文献2：Bentz，M.，Plesch，A.，Stilgenbauer，S.，Dohner，H.&Lichter，P.：Minimal sizes of deletions detected by comparativegenomichybridization，Genes chromosomes Cancer，172-175，1998.

非专利文献3：Kirchhoff，M.，Gerdes，T.，Maahr，J.，Rose，H.，Bentz，M.，Dohner，H.&Lundsteen，C.：Deletions below 10 megabasepairs are detected in comparative genomic hybridization by standardreference intervas，Genes chromosomes Cancer，410-413，1999.

专利文献1：特表2005-514051号公报。

发明内容

发明所要解决的问题