[发明专利]利用逆向基因工程技术开发蛋白质疫苗与禽流感疫苗的方法

权利要求书

1、一种蛋白质疫苗或新型病毒疫苗株的制备方法，包括：

(a)取得一标的抗原蛋白质至少一抗原决定位胜肽的胺基酸序列，并对应转码出该胜肽的野生型核酸序列；

(b)将该抗原决定位胜肽的野生型核酸序列，改质为于一宿主细胞中可辨识，编码有该抗原决定位胜肽的一合成型核酸序列；

(c)合成该合成型核酸序列的复数个引子，该等引子为与该合成型核酸序列具部分片段相同或互补的5-80个核酸序列，且该等引子中，正向引子的3’端与反向引子的3’端有5-10个互补的核酸序列；

(d)利用该等引子，于体外合成该合成型核酸；

(e)将该合成型核酸结合一带有结合与移位功能的核酸序列，与一羧基终端核酸序列的质体，形成一合成质体；

(f)将该合成质体转形入该宿主细胞，以生产该合成型核酸所编码的该抗原决定位胜肽；以及

(g)收集并纯化该抗原决定位胜肽。

2、如权利要求1所述的制备方法，其中，该抗原决定位胜肽的胺基酸序列为非自然存在的序列。

3、如权利要求1所述的制备方法，其中，该抗原决定位胜肽为该标的抗原蛋白质结构的亲水部位。

4、如权利要求1所述的制备方法，其中，该抗原决定位胜肽为该标的抗原蛋白质结构的疏水部位。

5、如权利要求1所述的制备方法，其中，该宿主细胞为微生物细胞、植物细胞或动物细胞。

6、如权利要求1所述的制备方法，其中，该宿主细胞为大肠杆菌细胞或酵母菌细胞。

7、如权利要求1所述的制备方法，其中，该标的抗原蛋白质的野生型核酸序列与该合成型核酸序列编码出同一胜肽。

8、如权利要求1所述的制备方法，其中，该合成型核酸是以聚合酶连锁反应(polymerase chain reaction，PCR)方法进行体外合成。

9、如权利要求1所述的制备方法，其中，该结合与移位功能的核酸序列来自假单胞菌属外毒素(pseudomonas exotoxin)的第一部位(domain I)与第二部位(domain II)。

10、如权利要求1所述的制备方法，其中，该标的抗原基因可崁入疫苗株相似基因的等位区利用逆向遗传学及类似流感病毒八质体系统技术产生一种对抗新型病原的疫苗株。

11、如权利要求9所述的制备方法，其中，该假单胞菌属外毒素的第一部位是配体部位(ligand)。

12、如权利要求11所述的制备方法，其中，该配体部位与一标的细胞的接受体结合。

13、如权利要求12所述的制备方法，其中，该标的细胞是至少一选自以下细胞所组成的群组：T细胞、B细胞、树突细胞、单核细胞以及巨噬细胞。

14、如权利要求12所述的制备方法，其中，该接受体是至少一选自以下接受体所组成的群组：TGF受体、IL2受体、IL4受体、IL6受体、1GF1受体、CD4受体、IL18受体、IL12受体、EGF受体、LDL受体、α2巨球蛋白受体、热休克蛋白。

15、如权利要求1所述的制备方法，其中，该羧基终端部分的核酸序列来自假单胞菌属外毒素的一部分。

16、如权利要求1所述的制备方法，其中，该羧基终端部分包括KDEL的胺基酸序列或对应的核酸序列。

17、一种抑制禽类流行性感冒病毒(Avian Influenza virus)的蛋白质疫苗，其结构包括：

一禽类流行性感冒病毒蛋白质的抗原决定位胜肽；

一具有结合与移位功能的胜肽；以及

一羧基终端胜肽。

18、如权利要求17所述的蛋白质疫苗，其中，该编码有禽类流行性感冒病毒蛋白质的抗原决定位胜肽是人工合成。

19、如权利要求17所述的蛋白质疫苗，其中，该禽类流行性感冒病毒是正黏液病毒科H5N1(orthomyxoviridae H5N1)。

20、如权利要求17所述的蛋白质疫苗，其中，该禽类流行性感冒病毒蛋白质的抗原决定位的核酸序列经过改质。