[发明专利]一种培育抗黄瓜花叶病毒植物的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种培育抗黄瓜花叶病毒植物的方法。

背景技术

病毒病害造成农作物的减产及品质的严重下降。为了得到抗病农作物，过去20年里育种学家通常采用把天然抗性基因转入对病毒敏感作物的方法(Goldbach R，Bucher E，Prins M.Resistance mechanisms to plant viruses：an overview.VirusRes 2003.92：207-12)。同时，转入外源抗病蛋白(Lodge JK，Kaniewski WK，TumerNE.Broad-spectrum virus resistance in transgenic plants expressing pokeweedantiviral protein.Proc Natl Acad Sci U S A 1993.90：7089-93；Watanabe Y，OgawaT，Takahashi H，Ishida I，Takeuchi Y，Yamamoto M，Okada Y.Resistance againstmultiple plant viruses in plants mediated by a double stranded-RNA specificribonuclease.FEBS Lett 1995.372：165-8；Boonrod K，Galetzka D，Nagy PD，Conrad U，Krczal G. Single-chain antibodies against a plant viralRNA-dependent RNA polymerase confer virus resistance.Nat Biotechnol 2004.22：856-62)以及抑制寄主代谢酶途径也得到广泛应用(Masuta C，Tanaka H，UeharaK，Kuwata S，Koiwai A，Noma M.Broad resistance to plant viruses in transgenicplants conferred by antisense inhibition of a host gene essential inS-adenosylmethionine-dependent transmethylation reactions.Proc Natl AcadSci U S A 1995.92：6117-21)。如今，除了天然的抗性特征，利用基因操作获得工程抗性已得到广泛应用。例如，利用病原来源的抗性(PDR)已在几个病毒株系中实现(Goldbach R，Bucher E，Prins M.Resistance mechanisms to plant viruses：an overview.Virus Res 2003.92：207-12；Abel PP，Nelson RS，De B，HoffmannN，Rogers SG，Fraley RT，Beachy RN.Delay of disease development in transgenicplants that express the tobacco mosaic virus coat protein gene.Science 1986.232：738-43；Lindbo JA，Silva-Rosales L，Proebsting WM，Dougherty WG.Induction of a Highly Specific Antiviral State in Transgenic Plants：Implications for Regulation of Gene Expression and Virus Resistance.PlantCell 1993.5：1749-59)，该方法是在植物中引入病毒基因组的一部分序列或表达完整或修饰的病毒蛋白及RNA，以打乱病毒的复制周期。越来越多的证据表明其中一种PDR是病毒转基因RNA沉默的结果。RNA沉默是导致真核生物序列特异的基因表达受抑的一种非常保守的现象。双链RNA(dsRNA)作为沉默诱发因子被RNase III酶同源蛋白Dicer剪切成21-25 nt的siRNA。这些siRNA指导RNA诱导的沉默复合物(RISC，一种多聚蛋白复合物)，造成靶标RNA的降解或在DNA水平上发挥作用造成染色质的修饰。