[发明专利]一种病原微生物DNA检测芯片及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种病原微生物DNA检测芯片，该芯片包括载体和位于载体上的核酸探针，该核酸探针至少包括检测以下目标基因ompW、olag、rtxC、o1391、rfbe(o157)、ipaH、aaF、bfpA、st、toxR、mapA、iroB、rfbG、rfbR、wzy、prf的探针，检测以上目标基因的探针优选为以下探针：SEQ ID No.73、SEQ ID No.70、SEQ ID No.71、SEQ ID No.72、SEQ ID No.77、SEQ ID No.80、SEQ ID No.81、SEQ ID No.82、SEQ ID No.74、SEQ ID No.90、SEQ ID No.84、SEQ ID No.94、SEQ ID No.98、SEQ ID No.97、SEQ ID No.99、SEQ ID No.102；优选还包括检测目标基因ct、tl、tdh、trh、lt、vt1、vt2、hlyA、spvC、cdt、yst、hlyO的探针，检测上述目标基因ct、tl、tdh、trh、lt、vt1、vt2、hlyA、spvC、cdt、yst、hlyO的探针优选以下探针：SEQ ID No.69、SEQ ID No.87、SEQ ID No.88、SEQ ID No.89、SEQ ID No.75、SEQ ID No.78、SEQ ID No.79、SEQ ID No.83、SEQ ID No.96、SEQ ID No.85、SEQ ID No.92、SEQ ID No.101；更优选还包括检测目标基因eae、ceuE，invA、yad、virF、iap的探针，检测目标基因eae、ceuE，invA、yad、virF、iap的探针优选为以下探针：SEQ IDNo.76，SEQ ID No.86，SEQ ID No.95，SEQ ID No.91，SEQ ID No.93，SEQID No.100。

2.如权利要求1所述的病原微生物DNA检测芯片，其中所述的病原微生物包括但不限于：霍乱弧菌、致病性大肠杆菌、空肠弯曲菌、小肠结肠炎耶尔森菌、副溶血弧菌、沙门菌、志贺菌、李斯特菌。

3.如权利要求1所述的病原微生物DNA检测芯片，其中所述载体为硝酸纤维素膜、各种表面处理的微珠、玻璃片，优选玻璃片为氨基、醛基、多赖氨酸化的玻璃片，更优选为氨基化的玻璃片。

4.一种如权利要求1～3任一项所述的病原微生物DNA检测芯片的制备方法，该方法包括：

(1)根据病原微生物的目标序列设计并合成扩增引物，这些扩增引物的解链温度大致相同；

(2)利用(1)所述的扩增引物从病原微生物的DNA中扩增目标检测探针；

(3)将所述探针固定在载体上。

5.如权利要求4所述的病原微生物DNA检测芯片的制备方法，其中所述的扩增引物为退火温度接近的引物；优选为SEQ ID Nos.9和10、SEQ ID Nos.3和4、SEQ IDNos.5和6、SEQ ID Nos.7和8、SEQ ID Nos.17和18、SEQ ID Nos.23和24、SEQID Nos.25和26、SEQ ID Nos.27和28、SEQ ID Nos.11和12、SEQ ID Nos.43和44、SEQ ID Nos.31和32、SEQ ID Nos.51和52、SEQ ID Nos.59和60、SEQ ID Nos.57和58、SEQ ID Nos.61和62、SEQ ID Nos.67和68；优选还包括以下所述的扩增引物：SEQ ID Nos.1和2、SEQID Nos.37和38、SEQ ID Nos.39和40、SEQ ID Nos.41和42、SEQ ID Nos.13和14、SEQ ID Nos.19和20、SEQ ID Nos.21和22、SEQ IDNos.29和30、SEQ ID Nos.55和56、SEQ ID Nos.33和34、SEQ ID Nos.47和48、SEQ ID Nos.65和66；更优选还包括以下所述的扩增引物：SEQ ID Nos.15和16、SEQID Nos.35和36、SEQ ID Nos.53和54、SEQ ID Nos.45和46、SEQ ID Nos.49和50、和SEQ ID Nos.63和64。