[发明专利]一种重组LFA3基因,及其融合基因与产物

说明书

技术领域

本发明属于免疫学领域，具体的说，涉及一种重组LFA3基因，及其融合基因与产物。

背景技术

近年来人们认识到，T淋巴细胞的激活需要至少2个信号，第一信号为T细胞抗原受体(TCR)和抗原提呈细胞表面MHC/抗原肽复合物结合产生所产生，这两种配体的结合需要特异性识别，与免疫反应的特异性有密切关系。第二信号为T细胞表面的其它辅助分子与抗原提呈细胞表面的相应配体结合产生，该信号又称为共刺激信号，目前已经发现了多种配体对。如果T细胞仅受到第一信号的刺激而无辅助信号的刺激，T细胞不但不被激活，而且还有可能造成该T细胞凋亡，在体内造成克隆无反应性(anergy)。

T细胞、抗原提呈细胞表面参与产生共刺激作用的分子统称为共刺激分子。目前公认的共刺激通路包括CD2：LFA3途径、B7：CD28途径和CD11a：ICAM-1途径等。这些信号传导途径在T细胞的免疫功能调节方面具有十分重要的作用，任何一种信号传导途径的阻断都有可能导致免疫功能下调。

借此原理，可以开发出自身免疫疾病如银屑病的治疗药物。从基因工程角度来看，开发这类药物的策略主要有三种。一种是研制信号通道相关蛋白的单克隆抗体，一种是研制信号通道相关蛋白的受体蛋白，一种是利用信号通道相关蛋白的拮抗剂。这三种策略都是利用一种(或多种)可以与信号通道蛋白特异性结合的蛋白来阻断信号传导过程。

CD2又称淋巴细胞功能相关抗原2(lymphocyte function associated antigen 2，LFA-2)或绵羊红细胞(SRBC)受体，为跨膜单链分子，表达于T细胞、胸腺细胞和NK细胞。分子量约50kDa，其成熟蛋白由332个氨基酸组成，其前体有一个19个氨基酸组成的信号肽。人CD2分子的配体是CD58(LFA-3)，其结构与CD2相似，亦为跨膜单链，其前体蛋白有一个28个氨基酸的信号肽，成熟蛋白由233个氨基酸组成。上述两者均属Ig超家族成员。CD58分布较广，表达于T、B细胞、单核细胞、树突状细胞、中性粒细胞、血小板、红细胞以及某些非造血细胞表面。CD2与CD58结合，能增强T细胞与APC或靶细胞间粘附，促进T细胞对抗原识别和CD2所介导的信号转导。

美国BIOGEN公司开发了一种FLA3-Ig融合蛋白(商品名Amevive)，由于该融合蛋白保留了与配体CD2结合的FLA3膜外区，在与表达有CD2分子的T细胞接触后，可以与CD2结合，阻断抗原呈递细胞(APC)表面的LFA3分子与CD2结合，从而阻断T细胞的激活、增殖和分化，抑制IL-2、IFN-γ、IL-8等细胞因子的产生。另一方面，融合蛋白的Fc段可以与细胞表面的Fc受体结合，使单核细胞、NK细胞向T细胞聚集，通过抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)，造成T细胞的凋亡。Amevive上市后用于治疗银屑病，并取得了良好的治疗效果。但是还有许多银屑病患者对Amevive的治疗表现为无反应性，因此，临床上需要一种特异性更强、亲和力更高的替代产品。

发明内容

本发明需要解决的第一个技术问题是提供一种新的重组LFA3基因，具有天然LFA3基因-接头-天然LFA3基因的结构。

本发明需要解决的第二个技术问题是提供一种新的融合基因，含有上述的重组LFA3基因和与之融合的人Ig抗体Fc片段基因。

本发明需要解决的第三个技术问题是提供一种含有该融合基因的重组表达载体。

本发明需要解决的第四个技术问题是提供一种含有该重组表达载体的宿主细胞。

本发明需要解决的第五个技术问题是提供一种重组LFA3-Ig融合基因的蛋白表达产物在制备治疗自身免疫疾病药物中的用途。

本发明的发明构思是这样的：

利用基因工程的方法，可以将本来位于细胞膜表面的特异性受体蛋白分子和免疫球蛋白(抗体)人工地组合起来，形成融合蛋白。一般是取编码膜蛋白的细胞外区和抗体恒定区的DNA序列，连接成融合基因，在适当的载体和细胞中表达，得到一个天然状态下不存在的融合蛋白分子，它既有细胞表面受体与其原有配体结合的特性，又象抗体一样为可溶性分子，且半衰期长，作用时间较为持久。和人源化抗体相比，受体(配体)的亲和力更强，而且全部蛋白成分都为人体固有，因此人源化的程度要比从鼠源抗体改造过来的抗体高，在体内不会引起免疫反应。目前已有多种可溶性受体被制备出来，根据它们所含有的不同细胞膜受体细胞外区，可产生各种特定的功能。人CD2分子的配体LFA-3则可以竞争性地与CD2分子结合，从而阻断CD2/LFA3这一共刺激通路。