[发明专利]一种重组抗CTLA4单克隆抗体及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及抗体药物技术领域。具体地说，本发明涉及一种新的重组抗溶细胞性T细胞相关抗原4单克隆抗体，及其制备方法和用途。

背景技术

T淋巴细胞的激活需要至少2个信号，第一信号为T细胞抗原受体(TCR)和抗原提呈细胞(APC)表面MHC/抗原肽复合物结合所产生，这两种配体的结合需要特异性识别，与免疫反应的特异性有密切关系。第二信号为T细胞表面的其它辅助分子与抗原提呈细胞表面的相应配体结合产生，该信号又称为共刺激信号，为抗原非特异性。

T细胞、抗原提呈细胞表面参与产生共刺激作用的分子统称为共刺激分子。目前公认最重要的共刺激通路为B7一CD28通路。B7位于抗原提呈细胞，与T细胞表面的CD28分子结合可以产生共刺激。当T细胞激活后，其细胞表面会出现另一种可与B7结合的分子——细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(Cytotoxic TLymphocyte associate Antigen-4，CTLA4)，它是维持体内T细胞稳态的负调控因子。细胞内CTLA4的表达受到严格的调控。在静止T细胞表面检测不到该蛋白，只有在T细胞活化转录增高时才可测到其mRNA。即使是活化的T细胞，也仅部分T细胞表面表达该蛋白。CTLA4与B7的亲和力是CD28的500-2500倍。CTLA4分子与B7结合，可以诱导T细胞凋亡，它是在T细胞激活后发挥免疫调控作用的重要分子。

1991年由Linsley等利用基因工程的方法将细胞膜表面CTLA4分子与免疫球蛋白Fc片段组合起来，形成一种人工构建的融合蛋白分子CTLA4-Fc，它与B7的亲和力大大高于CD28，可以封闭APC上的B7，阻断共刺激通路，抑制T细胞的激活。

CTLA4-Fc的N-末端含有人CTLA4的细胞外段，即N-末端的1-125号氨基酸残基，随后是人IgG1的重链铰链区、CH2和CH3区。上述基因序列装入适当的表达载体后，转入动物细胞(如CHO工程细胞)，可以表达出DNA序列对应的蛋白分子。由于保留了铰链区的2个半胱氨酸残基，CTLA4-Fc以等二聚体的形式分泌。另外，每条肽链上有2个N-糖基化位点，CTLA4和Ig部分各有1个。它的分子量大约为97KDa。

CTLA4-Fc的免疫抑制机理：由于CTLA4-Fc保留了与配体B7结合的CTLA4膜外区，它在与表达有B7分子的抗原提呈细胞接触后，可以与B7结合，从而使T细胞表面的CD28分子无法与B7结合。此时TCR仅接受了来自抗原提呈细胞MHC的第一信号，由于没有辅助信号的共刺激作用，而造成T细胞凋亡。在体内可以造成该克隆的T细胞被清除，造成克隆无反应性和免疫耐受。但它对于未受到第一信号刺激的T淋巴细胞无影响。相比之下，其它免疫抑制剂往往会没有选择地杀伤所有的T细胞克隆，造成明显的全身反应和毒副作用。

在CTLA4-Fc进行临床前研究及临床研究的过程中，以及将来成为药物后患者应用的过程中，均需要检测受试者(动物或人)或患者的血清CTLA4-Fc浓度，在某些造血系统的恶性疾患中，CTLA4可能会异常高表达，因此，在这类患者的诊疗过程中，也需要检测患者血清中CTLA4浓度。所以迫切需要一种能有效、快速检测CTLA4-Fc类药物及CTLA4的产品。

发明内容

本发明的需要解决的技术问题之一是提供一种重组抗溶细胞性T细胞相关抗原4单克隆抗体，该抗体用于体外检测CTLA4的浓度。

本发明需要解决的第二个技术问题是提供一种编码上述抗溶细胞性T细胞相关抗原4单克隆抗体的DNA分子。

本发明需要解决的第三个技术问题是提供一种表达载体。

本发明需要解决的第四个技术问题是提供一种真核宿主细胞。

本发明需要解决的第五个技术问题是提供一种上述单克隆抗体的用途。

本发明需要解决的第六个技术问题是提供一种该单克隆抗体的制备方法。

为解决上述技术问题，本发明一方面提供了一种重组的抗溶细胞性T细胞相关抗原4抗体，该抗体含有重链可变区和轻链可变区，其特征在于，轻链可变区具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，重链可变区具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。

本发明另一方面提供了编码上述单克隆抗体的DNA分子。该DNA分子含有SEQID NO:3所示的编码所述单抗轻链可变区的核苷酸序列，以及SEQIDNO:4所示的编码所述单抗重链可变区的核苷酸序列。

本发明第三方面提供了一种表达载体，该表达载体含有上述DNA序列以及与该序列操作性相连的表达调控序列。