[发明专利]一种高活性的人肝再生增强因子及其制备方法

权利要求书

1，制备编码氨基酸序列如序列表中的序列1所示的人肝再生增强因子的方法，其包括，用宿主细胞表达氨基酸序列如序列表中的序列1所示的人肝再生增强因子，然后分离纯化所述人肝再生增强因子，

其中分离纯化所述人肝再生增强因子的步骤包括：宿主细胞裂解变性后，按顺序用阳离子交换色谱复性，用分子尺寸排阻色谱纯化，用肠激酶酶切，用阴离子交换色谱纯化，

其中宿主细胞为含有载体pET28-ALR的大肠杆菌BL21(DE3)，其中载体pET28-ALR含有核苷酸序列如序列表中的序列2所示的核酸分子，

而且，所述方法包括如下步骤：

1)宿主细胞裂解变性后，裂解液用Sepharose FF柱复性，其中采用尿素浓度梯度复性缓冲液过柱复性，然后依次分别用含50mM、250mM和500mM咪唑的洗脱液洗脱；

2)将上述洗脱液过Sephedex G-25柱去除咪唑及盐离子；

3)用肠激酶酶切，然后将酶切产物过Sepharose FF柱和NTA柱，去除未酶切完全的产物；和

4)上一步的流出液过Q-Sepharose Fast Flow柱纯化，用0至1mol/L NaCl梯度洗脱，收集含人肝再生增强因子的洗脱峰。