[发明专利]桑寄生抗肝癌BEL－7402蛋白的制备方法

权利要求书

1.一种桑寄生抗肝癌BEL-7402蛋白制备方法，其特征在于具有以下工艺过程和步骤：

a.桑寄生粗品蛋白的制备：将干燥的中草药桑寄生粉碎成200目粉末，用0.1～0.3mol/L氯化钠溶液在4℃下浸提12～24小时，浸提液用布氏漏斗过滤，得滤液；在滤液中加入硫酸铵固体，调至饱和度为60～80％，随后在4℃下静置过夜；然后用离心分离机在6000rpm转速下低温离心分离20分钟，得沉淀物粗品蛋白CLP；

b.粗品蛋白的分子筛层析纯化：将上述所得的粗品蛋白CLP用去离子水溶解，并用Tris-HCI缓冲液透析，随后用孔径为0.45μ滤膜超滤；滤液上SephadexG₁₀₀分子筛层析柱，用0.05mol/L Tris-HCI缓冲液洗脱，流速为1毫升/分钟，每5分钟收集1管，分部收集；检测蛋白质含量后，合并收集管得二部分有效组分；然后冷冻干燥，得二部分分子筛凝胶层析产品，即为纯化后的桑生蛋白。

2.一种桑寄生抗肝癌BEL-7402蛋白的制备方法，其特征在于具有以下工艺过程和步骤：

a.桑寄生粗品蛋白的制备：将干燥的中草药桑寄生粉碎成200目粉末，用0.1～0.3mol/L氯化钠溶液在4℃下浸提18～24小时，浸提液用布氏漏斗过滤，得滤液；在滤液中加入硫酸铵固体，调至饱和度为60～80％，随后在4℃下静置过夜；然后用离心分离机在6000rpm转速下低温离心分离20分钟，得沉淀物粗品蛋白CLP；

b.粗品蛋白的CM-Sepharose Fast Flow层析纯化：将上述所得的粗品蛋白CLP用去离子水溶解，并用Tris-HCI缓冲液平衡，随后上CM-Sepharose Fast Flow层析柱，依次以0.05mol/L Tris-HCI缓冲液、含0.1mol/L氯化钠-0.2mol/L氯化钠的0.05mol/L Tris-HCI缓冲液洗脱，流速为10毫升/分钟，每5分钟收集1管，分部收集；检测蛋白质含量后，按含量合并产物为四部分；然后冷冻干燥，得四部分层析产物，即为纯化后的桑生蛋白。