[发明专利]一种由放射状土壤杆菌制备生物絮凝剂的方法

权利要求书

1.一种生物絮凝剂的制备方法，其特征在于：选用放射状土壤杆菌为生物絮凝剂菌种，经发酵培养和提取得水处理生物絮凝剂，该生物絮凝剂的制备采用以下步骤：

菌种的制备

初选培养基的重量组成(g/L)：

K₂HPO₄   0.5-1  MgSO4·7H₂O   0.3-0.5    FeSO₄·7H₂O   0.01-0.03   NaNO₃   3-5KCl 0.5-0.8蔗糖 30-50 琼脂 15-20pH 6.6-7.0。初选方法：将活性污泥系列稀释，涂布接种到筛选培养基上，30-32℃培养36-48hr，挑取生长迅速、菌体表面粘稠的菌株接种到固体斜面，30-32℃培养36-48hr，4℃保藏，备用；

复筛培养基的重量组成(g/L)：

蔗糖 20-50 酵母膏 0.2-0.5 尿素 0.2-0.5 NaCl 0.1-0.2 K₂HPO₄ 3-5 (NH₄)₂SO₄0.2-0.5 MgSO₄·7H₂O 0.2-0.3pH 7.0-7.5；

复筛方法：从斜面上挑取菌苔接种于含有复筛培养基的三角瓶中，接种后培养条件为90-120转/分，30-32℃旋转式振荡培养36hr，测定发酵液的絮凝活性；

筛选得到的放射状土壤杆菌的菌种特征为：

菌落凸起，全缘光滑。可产生3-酮基乳糖，接触酶、氧化酶和尿素酶阳性，可利用阿拉伯糖、葡萄糖、蔗糖、果糖、乳糖、麦芽糖、木糖、甘露糖、鼠李糖、有机酸盐和氨基酸作为碳源，不能利用纤维素、淀粉、琼脂糖、半乳糖作为碳源，可利用硝酸盐作为氮源；

2)产絮凝剂菌种发酵培养

絮凝剂发酵培养基的重量组成(g/L)：

蔗糖 20-50 酵母膏 0.2-0.5 尿素 0.2-0.5 NaCl 0.1-0.2 K₂HPO₄ 3-5 (NH₄)₂SO₄0.2-0.5 MgSO₄·7H₂O 0.2-0.3pH 7.0-7.5

将放射状土壤杆菌菌种按培养基总重量的3-5％的比例接种于装有絮凝剂发酵培养基的三角瓶中(发酵培养基装样量为150-200ml/500ml三角瓶)，接种后培养条件为30-32℃，90-120转/分旋转式振荡培养36-48hr备用；

3)生物絮凝剂的提取与制备

a)发酵液通过离心机离心分离10-20分钟，除去沉淀，取上清液备用；

b)向上清液中加入0.1—0.2％CaCl₂和2-3倍体积的95％乙醇，玻璃棒搅拌，沉淀5-10分钟得沉淀物；

c)将沉淀物用无水乙醇清洗，真空干燥得生物絮凝剂产品。

2.根据权利要求1所述的一种生物絮凝剂的制备方法，其特征在于：所述的初选培养基的重量组成(g/L)为：K₂HPO₄ 0.6 MgSO4·7H₂O 0.4 FeSO₄·7H₂O 0.02 NaNO₃4 KCl 0.6 蔗糖 40 琼脂 18pH 6.8。

3.根据权利要求1或2所述的一种生物絮凝剂的制备方法，其特征在于：所述的复筛培养基的重量组成(g/L)为：蔗糖 30 酵母膏 0.3 尿素 0.3 NaCl 0.15 K₂HPO₄ 4(NH₄)₂SO₄ 0.3 MgSO₄·7H₂O 0.25pH 7.25。

4.根据权利要求1、2或3所述的一种生物絮凝剂的制备方法，其特征在于：所述的絮凝剂发酵培养基的重量组成(g/L)为：蔗糖30，酵母膏0.3，尿素0.3，NaCl 0.15，K₂HPO₄4，(NH₄)₂SO₄ 0.3，MgSO₄·7H₂O 0.25，自然pH。