[发明专利]鸭肠炎病毒基因组DNA的提取及其序列

权利要求书

1.鸭肠炎病毒基因组DNA序列，其特征在于，全部核苷酸序列长度为156512 bp，至少编码78个开发阅读框，基因编码的氨基酸序列与α-亚科疱疹病毒具有同源性，其中5个基因仅与目前所知的禽疱疹病毒有同源性，基因组结构与水痘病毒属相一致，该序列为：SEQ NO.1。

2.一种鸭肠炎病毒基因组DNA的提取方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)将收集的病毒样品30,000×g离心30min，使细胞和游离病毒粒子沉淀；

(2)将步骤(1)所得沉淀用灭菌蒸馏水悬浮，-85℃～23℃冻融3次，30,000×g离心30min，所得沉淀重悬于预冷的Cell permeabilization buffer，置冰浴10min，30,000×g离心30min，弃上清，取沉淀，重复本步骤一次；

(3)重复步骤(2)离心后，弃上清，将沉淀悬浮于500μl Cell nuclei buffer，再加入500μl含600U微球菌核酸酶的2 x Nuclease buffer，混合均匀，37℃作用30min；

(4)加入60μl 0.2M EDTA终止反应，加入4ml Digestion buffer，用剪去末端的Tip头轻柔混匀，避免对病毒DNA的剪切作用，50℃过夜；

(5)加入等体积酚/氯仿，轻轻混匀，8,000×g离心5min，水相再用氯仿抽提1次，8,000×g离心5min；

(6)室温条件下，取上层水相，加入0.5倍体积的7.5M醋酸铵和2倍体积无水乙醇，轻轻混匀，16,000×g离心5min；

(7)步骤(6)所得DNA沉淀用70％乙醇洗涤2次，晾干，即可获得鸭肠炎病毒基因组DNA。