[发明专利]基于蛋白芯片的免疫共沉淀检测蛋白相互作用的方法以及一种蛋白相互作用检测试剂盒

权利要求书

1.一种基于蛋白芯片的免疫共沉淀检测蛋白相互作用的方法，其特征在于，  制备一Flag抗体芯片，然后将含有Flag-诱饵融合蛋白和Myc-猎物融合蛋白的细胞裂解液加入到芯片表面进行免疫共沉淀反应，经荧光标记c-Myc抗体检测诱饵蛋白和猎物蛋白是否具有相互作用。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，采用以下步骤：

步骤一：制备Flag抗体芯片，将醛基玻片分成多个芯片框，将anti-flag M2单抗及作为抗体对照的鼠IgG喷点到各芯片框内，保存备用；

步骤二：构建诱饵和猎物表达载体，将诱饵的编码基因构建到flag标签载体上，将猎物的编码基因构建到Myc标签载体上，分别形成诱饵融合蛋白和猎物融合蛋白；

步骤三：细胞转染及制备裂解液，将诱饵和猎物真核表达载体共转染到细胞中，收集细胞并充分裂解，将实验品细胞裂解液上清收集待用；同样制备阴性对照品细胞裂解液收集待用；

步骤四：检测蛋白相互作用，将实验品细胞裂解液和对照品细胞裂解液分别加入处理后的芯片中不同芯片框内，免疫共沉淀反应一定时间后，洗涤；在每一芯片框内再加入anti-c-Myc-Cy3，反应一段时间后洗涤，干燥后用荧光芯片扫描仪扫描；

步骤五：将荧光芯片扫描仪中获取的信号及数据输出，比较实验品和对照品的荧光信号，实验品信号强度强于对照品的，说明诱饵与猎物蛋白之间有相互作用，反之，没有信号或信号微弱的说明诱饵与猎物蛋白之间没有相互作用。

3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述步骤一中Flag抗体芯片用贴膜分为3×6个芯片框，每个芯片框内平行点入anti-flag M2单抗及作为抗体对照的小鼠IgG，anti-flag M2单抗和小鼠IgG各点3个重复点。

4.根据权利要求2或3所述方法，其特征在于，所述步骤四中，

芯片处理是指用封闭液封闭芯片，室温孵育，然后用TBST重复洗涤；

将实验品细胞裂解液和对照品细胞裂解液加入芯片框中的量为20μl/框；

所述免疫共沉淀反应指在室温保湿条件下反应2小时；

所述洗涤指用TBST洗涤15分钟，重复3次；

所述加入anti-Myc-Cy3单抗的浓度为1∶200，加入量为20μl/芯片框，反应在室温避光保湿条件下反应1小时。

5.一种蛋白相互作用检测试剂盒，其特征在于，包括一具有多个分区的醛基玻片，权利要求1至4任一所述方法中所述的FLAG和c-Myc标签载体和其对应的单抗，以及基于权利要求1至4任一所述方法的使用说明书。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述醛基玻片分为3×6个分区。

7.根据权利要求5或6所述的试剂盒，其特征在于，所述醛基玻片型号为CSS-100，所述FLAG标签载体为SIGMA公司的pFLAG-CMV-2，所述c-Myc标签载体为(CLONTECH公司的pCMV-Myc，所述FLAG单抗为SIGMA公司的ANTI-FLAGM2单克隆抗体，所述c-Myc单抗为SIGMA公司的单克隆ANTI-c-MYC Cy3 CONJUGATECLONE 9E10。