[发明专利]一种检测嗜肺军团菌抗原的免疫层析试纸及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种嗜肺军团菌抗原的检测试纸及其制备方法，特别是涉及一种检测嗜肺军团菌抗原的免疫层析试纸及其制备方法。 

背景技术

军团菌(Legionella)是1976年发现的。当时美国退伍军人于费城集会，期间暴发流行了一种原因不明的严重肺炎，与会者149人感染，34人死亡。从死者肺组织中分离得到一种新菌，命名为军团菌。目前，已发现的军团菌属有43个种、65个血清型，其中与人类疾病关系最密切的为嗜肺军团菌(Legionella pneumophila，LP)，研究表明，80％～85％的军团菌肺炎由LP引起，现已发现15个血清型的LP。 

军团病(Legionnarires′disease，LD)是由军团菌感染引起的一种急性细菌性呼吸道传染病，以军团菌肺炎和庞蒂亚克热为主要表现，易暴发流行。近年来，国外有许多军团病疫情的报道：2000～2002年，仅欧洲就共报道军团病189次，10322人感染。我国也有军团病小规模疫情的发生：2000年1月，北京市某新兵训练营地发生了军团病，发病率为89％；2000年7月，因空调系统冷凝水导致的庞蒂亚克热型军团病在某写字楼员工中发生，发病率为61.9％。 

大多数军团病患者有与其它病原体引起的非典型肺炎一致的临床表现，如咳嗽、发热和肌痛，胸部X片显示肺部浸润现象等，故常导致误诊、漏诊，未经治疗的军团病患者死亡率达25％。由于嗜肺军团菌是引起军团菌肺炎的主要病原体，故对其的快速检测显得尤为重要。嗜肺军团菌抗原检测的方法很多，例如：ELISA、PCR、免疫传感器技术等。但在实践中，这些方法的使用暴露出一些共同的劣势，例如：实验必须在专门的实验室中进行；需要电源和特殊的仪器；操作人员必须经过专门培训；实验系统不容易标准化，为使结果可信，需要进行多次预试验和设立多项对照；试验操作步骤繁琐，至少需要2小时以上。 

免疫胶体金技术是近年来迅速发展的快速检测技术，该技术与其它方法比较，优势在于：检测过程中标本处理简单，不需要专门仪器和人员培训，非专业技术人员按照说明书即可操作，并可迅速观察结果，很适合突发事件现场和基层使用。 

发明内容

本发明目的是提供一种检测嗜肺军团菌抗原的免疫层析试纸

(Immuno-Chromatographic Assay，ICA)。 

为解决上述技术问题，本发明采取以下技术方案：一种检测嗜肺军团菌抗原的免疫层析试纸(ICA试纸)，包括样品垫、紧密连接于所述样品垫一端的含有抗嗜肺军团菌血清抗原的抗体标记胶体金探针的金标垫、与所述金标垫的另一端紧密连接的硝酸纤维膜(NC膜)和紧密连接于所述硝酸纤维膜另一端的吸水垫；所述硝酸纤维膜包被有相互分离的检测线和质控线，所述检测线含有嗜肺军团菌抗原特异性抗体，所述质控线含有能与所述嗜肺军团菌抗原特异性抗体特异结合的抗抗体。 

所述嗜肺军团菌抗原特异性抗体为以嗜肺军团菌抗原为抗原免疫动物得到的抗体，所述嗜肺军团菌抗原可为嗜肺军团菌血清1型抗原、2型、3型、4型、5型、6型、7型、8型、9型或10型抗原，优选为嗜肺军团菌血清1型抗原，所述免疫动物的选择是多种多样的，如兔、猴、鸡或鼠等常用的免疫动物；所述嗜肺军团菌抗原特异性抗体的抗抗体优选为抗兔抗抗体，尤其优选为羊抗兔IgG；所述检测线含有的嗜肺军团菌抗原特异性抗体的浓度可为5-7mg/mL，所述质控线含有的能与嗜肺军团菌抗原特异性抗体特异结合的抗抗体的浓度可为3-5mg/mL。 

所述吸水垫和样品垫均由吸水材料制备。 

检测样品时可将上述检测嗜肺军团菌抗原的免疫层析试纸的样品垫直接浸于样品中；为使使用更加方便，所述检测嗜肺军团菌抗原的免疫层析试纸的背面还紧密连接一背板，背板材料的选择是多种多样的，如塑料、树脂或聚氯乙烯板(PVC板)等，再将该带有背板的免疫层析试纸装入试剂盒中，该试剂盒对应于样品垫的部位设有点样口，对应于检测线和质控线的部位设有观测窗。 

本发明的第二个目的是提供一种制备上述检测嗜肺军团菌抗原的免疫层析试纸的方法。 

本发明所提供的制备上述检测嗜肺军团菌抗原的免疫层析试纸的方法，包括以下步骤： 

1)制备嗜肺军团菌抗原特异性抗体和嗜肺军团菌抗原特异性抗体的抗抗体；将嗜肺军团菌抗原特异性抗体溶液喷到纤维素膜上形成检测线，将嗜肺军团菌抗原特异性抗体的抗抗体溶液喷到所述纤维膜的另一区域形成质控线，然后将吸水垫粘贴在所述纤维素膜的远离所述测试带的一端；