[发明专利]一种微囊藻毒素单克隆抗体及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种制备微囊藻毒素-LR的单克隆抗体的方法，包括以下步骤：

1)在微囊藻毒素-LR的第七位氨基酸残基N-甲基脱氢丙氨酸上引入一个氨基，得到经氨基修饰的微囊藻毒素-LR；再将该经氨基修饰的微囊藻毒素-LR与载体蛋白偶联得到完全抗原A；

2)将步骤1)的完全抗原A免疫小鼠，取免疫小鼠的脾细胞，与小鼠骨髓瘤细胞融合，筛选出阳性杂交瘤细胞株；培养所述阳性杂交瘤细胞株或将所述阳性杂交瘤细胞株注入同系小鼠腹腔诱生腹水，得到微囊藻毒素-LR的单克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中，用2-巯基乙胺在微囊藻毒素-LR的第7位氨基酸残基上引入一个氨基。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中的载体蛋白为牛血清白蛋白；所述偶联方法为戊二醛法。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中用于免疫的小鼠为Balb/c小鼠；免疫方法为：每只小鼠每次免疫所用的所述完全抗原剂A量为15-40μg，两次免疫的间隔时间为20-40天；免疫方式为皮下多点注射；

所述步骤2)中的小鼠骨髓瘤细胞为小鼠骨髓瘤细胞SP2/0。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中的筛选阳性杂交瘤细胞株的方法为：先用包被抗原筛选，再用微囊藻毒素-LR单体筛选至少1次；所述包被抗原为将所述步骤1)中的经氨基修饰的微囊藻毒素-LR多肽与载体蛋白偶联得到的完全抗原B；所述完全抗原B与所述完全抗原A中的载体蛋白不相同。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述阳性杂交瘤细胞株为能分泌抗Microcystin-LR单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株MC8C10，其保藏号为CGMCCNo.2101。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法中还包括纯化所述单克隆抗体的步骤。

8.权利要求1至7中任一权利要求所述的方法制备的微囊藻毒素-LR的单克隆抗体。

9.微囊藻毒素-LR的单克隆抗体，由保藏号为CGMCC No.2101的能分泌抗Microcystin-LR单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株MC8C10产生。

10.能分泌抗Microcystin-LR单克隆抗体的小鼠杂交瘤细胞株MC8C10，其保藏号为CGMCC No.2101。

11.权利要求8或9所述的微囊藻毒素-LR的单克隆抗体在检测微囊藻毒素-LR和/或纯化微囊藻毒素-LR中的应用。