[发明专利]一种利用KDR基因多态性预测冠心病易感性的方法及试剂

说明书

技术领域

本发明涉及一种用KDR基因多态性预测冠心病易感性的方法及试剂，更具体地说是通过测定人KDR基因多态性预测受试者对于冠心病的易感性，该方法可用于疾病的辅助诊断、治疗和新药开发，属于生物技术领域。

背景技术

心血管病已经成为全球严重危胁生命和健康的重要疾病，每年为此消耗了大量人力、物力和财力。能够找到这类疾病的早期预测标记意义非常明显。冠心病的发生是基因遗传倾向和一系列环境危险因素长期作用的结果所导致的，正常血管内的维护修复能够对抗环境危险因素所造成的血管损伤。

目前进行冠心病的遗传病因研究，多采用单核苷酸多态性(Single NucleotidePolymorphism)作为基因组标志的关联分析方法，是有效的。SNP是指染色体基因组水平上单个核苷酸变异引起的DNA序列多态性，在人群中的频率需＞1％，SNP是双等位基因标记，这种单碱基变化中有70.1％为同型碱基之间的转换：如G/A或T/C，29.1％为发生在嘌呤和嘧啶之间的颠换。C(胞嘧啶)是人类基因组中最易发生变化的位点，因为大多数是甲基化胞嘧啶，能够自发脱氨基转换为T(胸腺嘧啶)，SNP包含了已知多态性的80-90％，是最常见的遗传变异。

由于生存的选择压力导致SNP在单一基因和整个基因组中的分布呈不均匀性。SNP在基因非编码区的数量是编码区的4倍，总数可达3百万个(Brookes AJ.Theessence of SNP.Gene，1999；234：177-186.)。SNP以其密度高，平均每1kb就有1个；代表性强，位于基因内部的SNP可能直接影响蛋白质结构或表达水平；遗传稳定性好，同微卫星多态性比较而言；易于自动化分析，因SNP在人群中为双等位基因标记，可简单以“+/-或1/0”直接分型，成为很好的遗传标志。(Collins FS，Brooks LD，ChakravartiA.A DNA polymorphism discovery resource for research on human genetic variation.Genome Res，1998；8：1229-1231)。

位于染色体4q11-q12的KDR(kinase insert domain receptor(a type III receptortyrosine kinase))基因编码血管内皮生长因子(VEGF)的II型受体，是个1536个氨基酸的跨膜蛋白，且KDR是内皮祖细胞EPC(endothelial progenitor cells)的重要表面抗原。有限研究指出，VEGF/KDR通路在血管生成，血管修复方面发挥重要作用，且EPC的活性和数量与冠心病的发病风险密切相关。因此，KDR的基因多态性一定与冠心病的易感性有着重要的关系。

经过现有国内外文献检索，未见有KDR基因多态性与冠心病相关联的报道。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种预测冠心病易感性的方法。

本发明的第二个目的是提供一种预测冠心病的试剂，包括PCR引物和含有该引物的试剂盒。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种预测冠心病易感性的方法，通过提取宿主细胞的基因组DNA，测定受试者的KDR基因启动子区-604位点，编码区1192、1719位点的(对应NCBI的SNP库中标准编号分别是rs2071559、rs2305948、和rs1870377)基因型，预测受试者对冠心病的易感性：三个位点的危险等位基因-604C，1192A，1719A，分别增加冠心病的风险为1.24，1.32，1.38倍。同时具有的时候采用相乘的系数，此时受试者的易感性最高。

本发明提供了两种分离核酸，具有SEQ ID NO.1和SEQ ID No.2所示的碱基序列，SEQ ID NO.1为KDR的启动子区部分序列，其第177位是C，SNP-604的位点；SEQID NO.2为KDR的mRNA序列，其1192和1719位是A和A，分别是SNP1192和SNP1719位点。图1为位于多态性变异位点的示意图，SNP1192位于第7个外显子上，SNP1719位于第11个外显子上。

本发明提供了三组等位基因特异性的引物，具有SEQ ID NO.3至EQ ID NO.8所示的碱基序列，长度为19-22bp，而且可以特异性地扩增出SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2所示序列中SNP-604、SNP1192和SNP1719扩增产物。