[发明专利]乙型肝炎病毒表面抗原化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种乙型肝炎病毒表面抗原化学发光免疫分析测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

1)乙型肝炎病毒表面抗原校准品；

2)亲和素化的固相载体；

3)生物素化的乙型肝炎病毒表面抗体的多克隆抗体或单克隆抗体；

4)酶标记的乙型肝炎病毒表面抗体的多克隆抗体或单克隆抗体；以及

5)上述酶所作用的化学发光底物。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述亲和素化的固相载体为微孔板、塑料珠、塑料管或磁性颗粒。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述酶为碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶。

4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物为1，2-二氧乙烷类衍生物、鲁米诺或异鲁米诺。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述1，2-二氧乙烷类衍生物为(金刚烷)-1，2-二氧乙烷、3-(2′-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3″-磷酰氧基)苯基-1，2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star。

6.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物包括A液和B液，其中，

基于1000mL所述化学发光底物A液，包括3.29g Tris、3.26g硼砂、1.0g BSA、1.772g鲁米诺、0.5g苯并荧蒽、1mL Proclin 300，其pH值为8.2～8.8；

基于100mL所述化学发光底物B液，包括36.72g Na₂HPO₄·12H₂O、10.21g柠檬酸、1.0mL30％的H₂O₂、1mL Proclin 300，其pH值为5.0～5.8。

7.一种制备权利要求1所述试剂盒的方法，其特征在于包括以下步骤：

1)以乙型肝炎病毒表面抗原纯品配制乙型肝炎病毒表面抗原校准品；

2)固相载体包被亲和素；

3)使乙型肝炎病毒表面抗体的多克隆抗体或单克隆抗体生物素化；

4)用酶标记乙型肝炎病毒表面抗体的多克隆抗体或单克隆抗体；

5)分装上述乙型肝炎病毒表面抗原校准品、生物素化的乙型肝炎病毒表面抗体的单克隆抗体、酶标记的乙型肝炎病毒表面抗体的多克隆抗体或单克隆抗体和该酶所作用的化学发光底物；以及

6)组装为成品。

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述固相载体包被亲和素的步骤2)采用以下方法：

1)包被

用0.050M pH值为9.6的碳酸盐缓冲液配制成所需浓度的亲和素包被液，并将包被液负载于固相载体上；

2)用生理盐水洗涤上述固相载体；以及

3)封闭

用含1％BSA，pH值为7.0～7.5，浓度为0.010M的磷酸盐缓冲液作为封闭液封闭上述洗涤后的固相载体。

9.如权利要求7或8所述的方法，其特征在于，所述亲和素化的固相载体为微孔板、塑料珠、塑料管或磁性颗粒。

10.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述酶为碱性磷酸酶或辣根过氧化物酶。

11.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述化学发光底物为1，2-二氧乙烷类衍生物、鲁米诺或异鲁米诺。

12.如权利要求11所述的方法，其特征在于，所述1，2-二氧乙烷类衍生物为(金刚烷)-1，2-二氧乙烷、3-(2′-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3″-磷酰氧基)苯基-1，2-二氧乙烷、CSPD或CDP-Star。