[发明专利]钙离子激活的氯离子通道基因及其应用无效
申请号: | 200710120658.6 | 申请日: | 2007-08-23 |
公开(公告)号: | CN101372510A | 公开(公告)日: | 2009-02-25 |
发明(设计)人: | 马润林 | 申请(专利权)人: | 中国科学院遗传与发育生物学研究所 |
主分类号: | C07K14/47 | 分类号: | C07K14/47;A61K38/17;A61P15/06 |
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地址: | 1001*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 离子 激活 氯离子 通道 基因 及其 应用 | ||
技术领域
本发明涉及基因工程领域,具体地涉及一种钙激活的氯离子通道基因rCLCA3及其应用。
背景技术
在怀孕的大部分时间里,子宫肌膜(即子宫平滑肌)保持相对静止和放松的状态。但是在分娩时,它会有规律的收缩并将胎儿推出产道(Lopez Bernal& Tambyraja,2000;Wray,1993)。因此,在怀孕末期,伴随着阵痛的发作,应该存在一条向下调控途径来指导子宫保持静止状态,同时存在一条支配性的刺激物途径来促进子宫收缩(López Bernal et al.1995)。人们认为子宫肌膜在此阶段的收缩性被大量的生理学信号所触发,它通过离子通道调节来编排子宫兴奋性变化(Matharoo-Ball etal.,2003)。在怀孕和分娩过程中,诸如离子通道之类调节子宫平滑肌细胞兴奋性的蛋白,是履行这些变化的适当候选物。
K+,Ca2+,Na+离子通道的电流密度在怀孕和分娩进程中会发生显著的变化,这些电生理学数据支持了上述说法。在怀孕进程中,Na+和Ca2+离子通道被报道是向上调控,而K+离子通道是向下调控。Na+和Ca2+离子通道的向上调控与它们提高子宫收缩性的功能相一致,而K+离子通道的向下调控与它减弱子宫兴奋性的主要功能是相符的。离子通道赋予质膜兴奋性的能力表明怀孕不同时期,离子通道表达量的变化在控制子宫兴奋性和收缩性方面有着重要作用。
电生理学研究暗示钙激活的氯离子通道(CLCA)在控制妊娠进程中的质膜兴奋性方面起着重要的作用,它可能是通过增加膜电压来作用的。绝大多数的CLCA家族成员在哺乳动物细胞中表达时,其功能是Ca2+敏感的Cl-通道。此外,有些CLCA同族体作为媒介分子或肿瘤抑制分子,还有些CLCA同族体则在哮喘和胆囊纤维化过程中起作用。
目前还没有关于从子宫肌膜上直接克隆CLCA家族成员的报道,这就限制了我们对CLCA同族体在子宫收缩中的调控和功能的认识。
发明内容
(一)要解决的技术问题
本发明的目的是提供一种钙激活的氯离子通道基因rCLCA3,本发明的又一目的是提供该基因在制备预防妇女早产的药物中的应用。
(二)技术方案
本发明从小鼠的子宫肌膜上克隆了一个新的CLCA家族成员-rCLCA3基因,并且分析了该基因在妊娠第16天至第23天的表达水平。rCLCA3基因在妊娠过程中的向上调控用Northern blotting法检验。结果表明rCLCA3基因在子宫肌膜和平滑肌中高水平表达,正如其它的CLCA同族体一样,rCLCA3蛋白也经历了转译后的糖基化和水解过程。用rCLCA3基因瞬时转染CHO细胞,发现可引起钙激活的氯离子电流。
本发明提供了钙激活的氯离子通道蛋白rCLCA3,其氨基酸序列如SEQID NO:1所示,共923个氨基酸。
本发明还提供了钙激活的氯离子通道基因rCLCA3,其核苷酸序列编码前述的氨基酸序列SEQ ID NO:1,其cDNA全长为3.1kb。
本发明公开了所述的氯离子通道蛋白在制备预防妇女早产的药物中的应用。
本发明公开了所述的氯离子通道基因在制备预防妇女早产的药物中的应用。
本发明还公开了钙激活的氯离子通道阻断剂在制备预防妇女早产的药物中的应用。
优选地,所述阻断剂是尼氟酸。
(三)有益效果
本发明首次从小鼠子宫肌膜上直接克隆到CLCA家族成员-rCLCA3基因,并分析验证了其表达产物作为钙激活的氯离子通道在控制子宫收缩中的作用,从而揭示了钙激活的氯离子通道阻断剂在制备预防妇女早产的药物中的应用,为预防妇女早产提供了新的有效途径。
附图说明
图1是rCLCA3基因在妊娠期第16天~第23天,以及在不同组织中的表达量的Northern blotting检测图;
图2是表达EGFP-标记的rCLCA3基因的CHO细胞共聚焦显微镜扫描图;
图3是rCLCA3蛋白的Western blotting检测图;
图4是rCLCA3蛋白的电生理学特性检测图。
具体实施方式
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