[发明专利]一种提高牛、羊胚胎移植妊娠率的方法

说明书

技术领域

本发明涉及胚胎移植技术，具体地说涉及一种提高牛、羊胚胎移植妊娠率的方法。

背景技术

胚胎移植技术能充分利用优良种畜的遗传资源，迅速扩大畜群的良种比例。同时，此技术也是治疗哺乳动物不孕症的有效手段。然而，家畜胚胎移植技术的效率依然未达到理想的水平，如奶牛新鲜胚胎受胎率仅为55％-60％，冷冻后解冻胚胎受胎率仅为45％-50％，体外受精胚胎受胎率在30％左右，而体细胞核移植克隆胚胎的受胎率仅为10％-20％。绵羊和山羊胚胎移植效率基本与此相同。但是，自然交配或人工授精技术的妊娠率能达到80％-90％。通过以上数字比较发现，移入胚胎有近一半发生早期死亡，一些新型技术的死亡率更高，达80％-90％。由于移植胚胎的遗传品质、生产成本较高，早期胚胎死亡带来巨大经济损失，这直接限制了胚胎移植技术在生产中的应用。因此，提高移入胚胎的受胎率是畜牧生产和科学研究所必需。

母畜妊娠是胚胎与母体子宫互作的结果，母畜排出的卵子在输卵管完成受精以后，转移到子宫，同时不停向前发育。牛、羊胚胎发育到囊胚阶段分泌一类酸性糖蛋白分子IFN-tau，IFN-tau作用于子宫内膜细胞，这些细胞产生反应，抑制了溶解黄体物质PGF_2α的合成与释放，母体卵巢上的周期黄体发育为妊娠黄体，分泌大量的孕激素。子宫组织在孕激素作用下，腺体发育并分泌多种营养物质，形成子宫乳，促进早期胚胎的发育和附植。目前的研究认为IFN-tau是胚胎发出的最初妊娠信号。如果胚胎分泌量不足，母体不能发生妊娠反应，卵巢上的黄体将被溶解，继而孕激素分泌量下降，子宫腺体发育不全，子宫中营养物质缺乏，胚胎不能正常发育，最终妊娠失败。因此，从理论上说，母体在合适的时间接受足量的IFN-tau是妊娠建立的基础，通过提高子宫内IFN-tau的水平将有望提高牛、羊胚胎的妊娠率。然而，目前还没有相关的研究和报道。

发明内容

本发明的目的在于针对上述不足提供一种提高牛、羊胚胎移植妊娠率的方法。该方法通过提高子宫内IFN-tau的水平来提高牛、羊胚胎妊娠率。

胚胎移植时，由于胚胎质量差或胚胎与母体同期化程度不一致，是导致妊娠识别失败的主要原因。提高子宫内IFN-tau的水平，母体会及时发生妊娠反应，分泌子宫乳，促进胚胎发育，一些级别稍差或发育滞后的胚胎会发育正常，最终顺利完成妊娠建立。

本发明提出三种优选方案来提高妊娠识别期母体子宫内IFN-tau的水平，从而增强母体对胚胎的识别。

第一种方法是在移植液中添加IFN-tau。IFN-tau可以通过基因工程手段大量生产，首先克隆牛、羊IFN-tau基因，并与表达载体连接后在大肠杆菌中表达，然后分离纯化此蛋白，再将此蛋白添加到胚胎移植液中，与胚胎同时注入母体子宫内，以提高母体妊娠率。IFN-tau的添加量根据蛋白活性确定，通常约为1--2μg/次移植。

第二种方法是将正常胚胎与孤雌发育胚胎共移植。用体外成熟的牛、羊卵子，经化学试剂或电激活诱导孤雌发育，发育到囊胚后冷冻保存。在进行胚胎移植时，孤雌胚胎与正常胚胎按1∶1比例同时注入子宫内。孤雌胚胎分泌的IFN-tau会促进正常胚胎发育与附植。

第三种方法是正常胚胎与分泌IFN-tau的活组织碎片共移植。将体外受精胚胎或性别鉴定后不再使用的体内受精胚胎，将其内细胞团破坏，仅保留滋养层细胞块，或附植前胚胎组织片。胚胎移植时，正常胚胎与滋养层细胞块或附植前胚胎组织片(60个细胞左右)，按照1∶1的比例共同移入受体母牛子宫内，滋养层细胞分泌的IFN-tau会促进正常胚胎发育和附植。

IFN-tau外源增加的量过多还未发现对胚胎产生不良影响，但其对胚胎或子宫腺体发育的促进作用会消失。

当然，本领域技术人员可以按照本发明的精神，通过其他途经来提高子宫内IFN-tau的水平来提高牛、羊胚胎妊娠率，例如：IFN-tau与缓释佐剂混合后注入子宫腔内或制备成缓释微胶囊投入子宫内等。

本发明通过提高牛、羊子宫内IFN-tau的水平，来提高牛、羊胚胎移植的妊娠率，本发明方法能使牛、羊胚胎移植妊娠率比现有技术提高15％-20％，冷冻解冻胚胎的妊娠率达到65％-75％。本发明方法操作简便，应用成本低廉，效果显著，对动物不产生任何有害影响，可以在牛、羊胚胎移植产业和胚胎工程中广泛应用，具有广阔的市场前景。

附图说明