[发明专利]游离前列腺特异性抗原化学发光免疫分析测定试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及免疫分析医学领域，具体地，本发明提供了一种游离前列腺特异性抗原化学发光免疫分析定量测定试剂盒及其制备方法。

背景技术

前列腺特异性抗原(PSA)是人体前列腺上皮组织细胞分泌的一种分子量为30～33kDa的单链糖蛋白分子。PSA由前列腺分泌之后，首先进入精液，成为精液浆的一个重要蛋白组分，浓度大约为0.5～5mg/mL。PSA通常以低浓度释放到健康男性的血液中，在人体中主要存在于男性前列腺组织、精液和血清中，有研究表明女性血清中也可以检出低浓度的PSA。

PSA在精液中以游离PSA(free-PSA，f-PSA)形式存在，在其进入血液后，会和血液里的其它蛋白分子结合，形成结合态的PSA(complexed-PSA，c-PSA)。正常男性血液中的PSA水平一般低于4ng/mL，f-PSA水平一般低于2ng/mL。PSA在前列腺癌(prostate cancer，PCa)病人血清中的浓度水平高于正常人，近年来作为一种器官特异性的肿瘤标志物，取代前列腺酸性磷酸酶(prostate acid phosphatase，PAP)成为筛查PCa的主要指标。相关研究表明良性的前列腺增生(benign prostatehyperplasia，BPH)病人血清中，PSA水平也会相应的升高，随着年龄的增加，人血清PSA水平也会有不同程度的升高，因此在4～10ng/mL的PSA浓度范围，就形成了“诊断灰区”。相继有学者提出不同的诊断指标来改善单一检测PSA的缺陷，诸如：前列腺生长速率(PSAvelocity，PSAV)、前列腺密度(PSAdensity，PSAD)和年龄特异参考值范围(age-specific reference ranges，ASR-RS)等，这些指标在前列腺癌评价中都有应用的局限性，一直存在争议。随着对前列腺疾病和PSA研究的不断深入，研究发现PCa病人血清中f-PSA浓度水平与BPH病人以及正常人相比，明显偏低，因此引入一个新的临床指标——游离前列腺特异抗原百分率(free/total PSA ratio)。该参数对PCa的特异性更高，同时也降低了临床检验的假阳性率。

对f-PSA的定量分析，目前常用的是放射免疫分析(RIA)和酶联免疫吸附分析(ELISA)，其中RIA必须用¹²⁵I等放射性元素标记，检测设备复杂，必须用专门的仪器测定，其放射性核素的半衰期短，不能长期保存，测定结果不稳定，同时也给实验操作人员带来了放射性伤害。ELISA检测灵敏度不够高，检测范围窄，影响因素较多，易造成假阴性和假阳性等缺点也不能满足临床的要求。化学发光免疫分析方法(CLIA)应运而生。

化学发光免疫分析(Chemiluminescence Immunoassay，CLIA)于1977年问世，1985年第一代化学发光免疫分析试剂盒研制成功并投放市场。进入九十年代，化学发光免疫分析试剂盒的研制和自动化测量仪的生产取得了突破性进展，从而进入高速发展阶段。化学发光免疫分析是继荧光、放射性同位素和酶免疫分析之后发展起来的一项新的免疫分析技术，根据大量的实验结果及临床应用资料，从实用性、稳定性、准确性及发展前景来看，在非放射性标记分析技术中化学发光免疫分析处于领先地位，代表了当今世界发展的方向和潮流，它不仅具有免疫反应的特异性，而且具有化学发光反应的高灵敏度(检测限度可达10^-15～10^-18mol/L)。化学发光免疫分析技术具有灵敏度高、快速、准确、重复性好、效期长并安全无毒无污染等优点，成为取代放射免疫分析和酶免疫分析技术的首选。

现有技术中的化学发光免疫分析试剂盒为封闭式全自动化学发光测量系统，需要昂贵的全自动化学发光测量仪，从而限制了推广使用，无法广泛地应用于临床诊断和科研工作。本发明是在酶联免疫分析的基础上应用酶催化发光底物，通过检测发光底物产生的光信号代替酶联免疫分析中的显色底物，因而其灵敏度大大提高，并且操作简便适用性广，既可应用于开放式的半自动化学发光测量仪，也可用于全自动的测量系统，可实现大批量快检测，使用成本低，更易推广应用。

发明内容