[发明专利]一种人尿激肽原酶及其制备方法

权利要求书

1.一种人尿激肽原酶，采用十二烷基硫酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳，即SDS-PAGE电泳法测定显示单一条带，具有以下特征：

1)SDS-PAGE电泳测定的分子量为43000±3000Da；

2)高效液相层析(HPLC)仅得到单一峰；

3)比活性不低于8PNA单位/毫克·蛋白，其主要活性成分的氨基酸序列：

2.制备根据权利要求1所述的人尿激肽原酶的方法，其步骤为：

1)将鲜的男性尿液中加入3％脱乙酰甲壳素吸附，调节pH至4.5～5.5，用1～25％的硫酸铵溶液，调节pH至5.0～13.0洗脱，加入50％硫酸铵，沉淀蛋白，得到人尿激肽原酶粗品；

2)将人尿激肽原酶粗品溶解，经扩张床强阴离子交换柱(Streamline Q XL)层析；再经苯基交联琼脂糖快速流凝胶柱(phenyl Sepharose 6 Fast Flow)层析；人尿激肽原酶溶液60℃恒温加热10小时，得到纯度较高的、去除病毒的人尿激肽原酶中间体；

3)将上述人尿激肽原酶中间体溶液上亲和层析柱，作为亲和层析的介质为苯扎嘧啶交联琼脂糖凝胶(Benzami dine Sepharose 6B，GE Healthcare公司)，用平衡缓冲溶液冲洗柱子，去除杂蛋白，缓冲溶液的pH值为3-11，利用不同浓度的盐洗脱液，分别将人尿激肽原酶的两个组分洗脱下来，洗脱是在电导值5-50ms/cm和20-80ms/cm分别进行，收集电导值5-50ms/cm下洗脱得到的高分子人尿激肽原酶。

3.根据权利要求2所述的人尿激肽原酶的制备方法，其中步骤1)中，用8～12％的硫酸铵溶液，调节pH至7～9洗脱。

4.根据权利要求3所述的人尿激肽原酶的制备方法，其中步骤3)中使用的平衡缓冲溶液包括Tris-HCl缓冲溶液、磷酸盐缓冲溶液、醋酸盐缓冲溶液或柠檬酸钠缓冲溶液；优选，Tris-HCl缓冲溶液。

5.根据权利要求3所述的人尿激肽原酶的制备方法，其中步骤3)中洗脱是在电导值20-25ms/cm下进行以获得高分子人尿激肽原酶。