[发明专利]一种对白细胞进行分类的试剂和方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种细胞分类试剂及对细胞进行分类的方法，特别是涉及 一种用于对血液中白细胞进行分类的试剂以及利用该试剂对血液中白细胞 进行分类检测的方法。

背景技术

用患者的全血对白细胞进行分类计数，为临床诊断和治疗提供依据， 具有十分重要的意义。

迄今为止，有关对白细胞进行分类的装置和方法发表了许多。这些装 置是将血液用溶血剂或染色剂处理，基于处理后的细胞的物理学、电学或 光学特性来对白细胞进行分类计数。

例如，有的分类方法采用染色剂对白细胞进行染色，检测染色后白细 胞发出的荧光来对白细胞进行分类；有的分类方法采用溶血剂对白细胞进 行特殊处理，检测其电信号或光散射信号，从而对白细胞进行分类。

现有技术一公开了使用白细胞四分类测定用试剂和嗜碱细胞测定用试 剂，将白细胞五分类的方法。白细胞四分类测定用试剂包括至少一种离子 表面活性剂、至少一种带负电的有机化合物、一种非离子表面活性剂和缓 冲剂，其与第一份血样作用，将血细胞分成淋巴细胞、单核细胞、嗜酸细 胞和嗜碱细胞加中性粒细胞四个类群；嗜碱细胞测定用试剂，与第二份血 样作用，将血细胞分成嗜碱细胞和其他细胞类群。综合两种结果将白细胞 五分类。检测方法为两角度激光散射法。

现有技术二提出了通过两角度光散射使用白细胞四分类试剂和嗜碱细 胞测定试剂将白细胞五分类和计数的方法，四分类试剂包括至少一种离子 表面活性剂用以溶解红细胞和损伤白细胞膜，至少一种带负电的有机化合 物用以与白细胞中带正电荷的物质结合使白细胞形态发生变化，一种非离 子表面活性剂和用以调pH的缓冲液。嗜碱细胞测定试剂包括至少一种聚合 度3-10的聚氧乙烯类非离子表面活性剂，至少一种阳离子表面活性剂，一种 缓冲液调pH至2.5-4.0。在第一份血样中加入第一试剂将白细胞分成四个群： 淋巴细胞群、单核细胞群、嗜酸细胞群、中性粒和嗜碱细胞群；在第二份 血样中加入第二试剂，根据细胞的形态和大小，用来区分白细胞中的嗜碱 细胞，从而获得白细胞五分类结果。

现有技术三是关于对白细胞四分类的试剂，这种试剂包括至少一种离 子表面活性剂，可以是阳离子或两性表面活性剂中一种，用来溶解红细胞 同时部分损伤白细胞膜；至少含一种带阴离子的有机化合物，通过与白细 胞上带正电荷的组分结合使各类白细胞形态差异显现；一种非离子表面活 性剂和用来调整pH值的缓冲剂。检测方法可为两角度激光散射法。

现有技术四提出使用含至少一种阴离子或两性表面活性剂短时间内溶 解红细胞，同时维持白细胞在一定时间内保持或接近原始状态，通过收集 前角光散射和侧向光散射信号对白细胞进行四分类。

现有技术五提出了一种从全血样本中快速分离、分析白细胞的方法和 试剂系统。该溶血剂系统由第一试剂选自甲酸、乙酸及两者的混合物和第 二试剂抑制剂组成。试剂使红细胞溶解并使白细胞发生微小改变以使可通 过仪器对细胞进行五分类。其优点和独特性在于其惊人的溶血速度并能对 白细胞进行进一步修饰。溶血后加入抑制剂，防止进一步的溶血及白细胞 明显的变化。血样经过处理后能保持细胞的免疫化学特性。检测方法可为 两角度光散射法，或直流阻抗和射频阻抗法，或直流阻抗和光散射法。

现有技术六公开了一种对白细胞进行五分类的溶血剂和方法。溶血剂 包括芳香族氧乙醇、pK值接近8.5的有机缓冲剂、非离子去垢剂。首先， 血样与稀释液混合，加入所述溶血剂溶解红细胞，在至少30秒内不影响白 细胞的光散射特性，通过收集四个角度光散射信号，从而对白细胞进行五 分类。

现有技术七是通过一种pH 2.6-4的酸性溶解剂对红细胞快速溶解和白 细胞保持完整后加入抑制剂可以对白细胞进行五分类的方法，其检测系统 可以使用光散射也可以使用射频/直流阻抗法。

但是，以上现有技术中还存在许多不足。

比如，现有技术三、四都是通过两角度光散射法将白细胞进行分成淋 巴细胞，单核细胞，中性粒细胞和嗜酸性粒细胞四个类群，但不能将嗜碱 性粒细胞分离出来。

现有技术一、二中公开的分类方法都是通过两种试剂分别与两份血样 作用，在两个通道进行分类，综合对白细胞进行五分类；现有技术六可以 在一个通道中对白细胞进行五分类，但要检测四个角度的散射光信号，仪 器的构成变得复杂，仪器的成本较高。