[发明专利]大规模生产病毒抗原的方法

说明书

本申请是申请日为2002年12月10日的中国专利申请02827977.8“大规模生产病毒抗原的方法”的分案申请。

技术领域

本发明涉及经改进的在与微载体结合的粘附细胞培养物上生产病毒抗原的方法，其中该方法提供了增加的每单位培养基体积的病毒抗原产量。本发明也涉及粘附细胞的细胞培养生物质，其具有与各汇合细胞培养相比增加的细胞密度和微载体浓度。

背景技术

有效的疫苗生产需要大量的以高产量从宿主系统中生产出的病毒的生长。病毒株生长的培养条件对于获得该株系的可接受的高产量来说具有重大的意义。因此，为了最大化所想要的病毒的产量，系统和培养条件都必须特定地适合于提供对于产生所想要的病毒来说有利的环境。因此，为了获得多种病毒株的可接受的高产量，需要提供了对于大量不同的病毒来说最佳生长条件的系统。

仅有的在经济上可实施的方法是反应器方法，因为可以按比例进行扩大以适于市场大小和所需的疫苗剂量。对于粘附细胞，使用传统微载体的载体方法在目前对于大规模培养病毒增殖所需的细胞来说是最好的选择(Van Wezel等人，1967，Nature 216：64-65；Van Wezel等人，1978，Process Biochem.3：6-8)。已经描述了在微载体上大规模生产脊髓灰质炎病毒、甲型肝炎病毒、HSV或马立克氏病病毒的方法(US 4,525,349；Widell等人，1984，J.Virological Meth.，8：63-71；Fiorentine等人，1985，Develop.Biol.Standard，60：421-430；Griffiths等人，1982，Develop.Biol.Standard.，50：103-110)。目前基于微载体培养的方法允许使用最多至1200L的发酵罐大小来生产病毒。

Caij等人(1989，Arch.Virol.，105：113-118)比较了在微载体培养物和常规的单层培养物上猪瘟病毒的病毒滴度的产量，并发现使用微载体系统可以获得更高的每单位体积培养基的病毒产量。

Griffiths等人(1982，Develop.Biol.Standard.，50：103-110)研究了微载体浓度对于细胞生长和HSV生产的影响。已经发现最佳的微载体浓度对于达到高细胞密度是必需的，其也影响所获得的病毒产量。可是，在灌注系统中更高的微载体浓度由于细胞层从小珠上脱落而导致细胞损失。

在微载体系统上的病毒生产方法的生产力取决于病毒、细胞、微载体的类型和系统中所获得的细胞密度。细胞培养中更高的微载体浓度允许更高的总细胞数。可是，微载体是昂贵的，而且在这些条件下，由于细胞层在系统中受到剪切力的影响而从小珠上脱落，从而可能发生细胞损失。这意味着对于更高的病毒产量需要更大体积的微载体细胞培养物，但是这增加了对于处理和纯化这样的大体积所必须作出的努力。

对于病毒增殖来说，重要的是达到最佳的细胞密度来获得最大病毒产量。允许病毒与细胞进行有效的吸附也是重要。因此，在常规方法中，于感染之前减小生长培养基的体积以便以最小的培养物体积和以更好的病毒与细胞的比例让病毒吸附到细胞上。可是，为了获得最佳的病毒增殖，在合适的吸附时间之后再次将培养基体积增加以便让细胞保持存活力和/或生长。但是这增加了含有细胞和/或病毒的培养基体积，增加培养基体积具有这样的缺点，即不得不处理大体积来进一步从细胞或者细胞培养基中纯化出病毒。

在病毒感染爆发的时候，关键性的是及时地生产大量的疫苗以便在非常短的时间内提供几百万的疫苗剂量。因此，存在对于安全和有效的生产病毒和抗原的方法的持续需求。此外，还有对于获得病毒增殖的方法的需求，其使用已经可使用的材料和要求最少的消耗时间的操作，例如处理体积减少的细胞培养基和促进用于疫苗生产的纯化和下游处理。

发明内容

本发明的一个目的是提供在与微载体结合的粘附细胞的细胞培养物中生产病毒或病毒抗原的方法。

提供以小细胞培养体积来生产病毒的方法也是本发明的一个目的。

提供与生长至汇合的原始细胞培养物相比具有更高的细胞密度的粘附细胞的细胞培养物，这也是本发明的一个目的。

本发明的一个目的是提供与微载体结合的粘附细胞的细胞培养物，其与生长至汇合的原始细胞培养物相比具有更高的细胞密度，其中这些细胞用病毒进行了感染。

具体实施方式